ГОСТ Р 55992.2—2014
5.3.1.2 Принцип метода
Определение основано на флюоресценции комплекса фенилаланина в реакции с нингидрином.
Реакция усиливается дипептидом Ьлейцил-Ьаланином в присутствии буфера. Медный реагентисполь
зуется для дальнейшего усиления флуоресценции.
5.3.1.3 Спектрально-люминесцентные характеристики
Максимум флуоресценции на длине волны 486 нм при возбуждении на длине волны 390 нм. В за
висимости от типа планшета и типа флюорометра измерение флюоресценции должно производиться в
диапазоне длин волн от 440 до 620 нм при возбуждении от 330 нм до 430 нм.
Интенсивность флюоресценции пропорциональна количеству фенилаланина в пробе.
П р и м е ч а н и е — Тип прибора и тип ппаншета должны быть указаны изготовителем в инструкции к набо
ру реагентов.
5.3.1.4 Первичные образцы для анализа
Непосредственное определение проводится в дисках диаметром 3.2 мм, которые выбиваются с
помощью специального устройства (инструмента для выбивания дисков, пробойника, см. п. 4.4,
ГОСТ Р 55992.1) из «сухих пятен» крови новорожденных на тест-бланках фильтровальной бумаги марки
Whatman 903 или аналогичной по своим свойствам.
5.3.1.5 Количество определений
Один набор должен быть рассчитан но менее чем на 960 определений.
5.3.1.6 Компоненты набора
В состав набора должны входить:
- калибраторы (не менее 6 уровней) с аттестованной концентрацией фенилаланина от 0 до
1240 мкмоль/л. предназначены для построения калибровочной кривой. Должны содержаться в закры
том пластиковом конверте с влагопоглотителем и представлять собой высушенные пятна крови на
фи льтровальной бумаге той же марки, на которой выполняются исследования «сухих пятен»
крови новорожденных. Полная калибровочная кривая должна быть построена для каждого планшета.
П р и м е ч а н и я
1 Значения концентрации фенилаланина в калибраторах, количество калибраторов, срок годности и усло
вия хранения должны быть указаны в инструкции к набору. Точные значения концентрации фенилаланина зависят
от лота набора реактивов, серии калибратора, и должны быть указаны в контрольном сертификате —
сертификате качества, прилагаемом к набору, и на этикетках к каждому калибратору.
2 Изготовитель должен представить информацию о методах аттестации значений в калибровочных матери
алах. а также данные о прослеживаемости значений результатов измерений в калибровочных материалах. Эта ин
формация должна быть указана в инструкции к набору реагентов.
- контрольные материалы. Должно быть не менее 2-х контрольных образцов (не менее 3-х пятен
для каждой концентрации) с концентрацией фенилаланина в области нормальных и повышенных кон
центраций. Контрольные материалы каждой концентрации должны содержаться в закрытом пластико
вом конверте с влагопоглотителем и представлять собой высушенные пятна крови на фильтровальной
бумаге той же марки, на которой выполняются исследования «сухих пятен» крови новорожденных.
П р и м е ч а н и я
1 Значения концентрации фенилаланина в «сухих пятнах» контрольных материалов правильности, количес
тво контрольных материалов, срок годности и условия их хранения должны быть указаны в инструкции к набору.
Точные значения концентрации фенилаланина в контрольных материалах должны быть указаны в контрольном
сертификате (сертификате качества), прилагаемом кнабору реактивов, и на этикетках на контрольных материалах.
2 Информация о методах аттестации значений концентрации фенилаланина в контрольных материалах
должна быть представлена в инструкции к набору реактивов или в паспорте к контрольным материалам.
3 Информация о прослеживаемости значений результатов измерения концентрации фенилаланина в калиб
ровочных и контрольных материалах правильности должна быть представлена в инструкции к набору реактивов.
См. п. 4.2.5 настоящего стандарта.
4 Рекомендуется участие лаборатории а программах внешней оценки качества результатов определения
фенилаланина а «сухих пятнах» крови при неонатальном скрининге;
- реактивдля выделения (экстракции фенилаланина) из цельной крови (этанол, цинк-сульфатный
или другой реактив, если это допустимо);
- реагент с нингидрином;
- буферный раствор, pH 5,8;
и