ГОСТ Р 53430—2009
Для приготовления разведений готовят все необходимые стерильные материалы ипосуду всоответ
ствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9 см2или колбы с 90 см2растворов
хлористого натрия или фосфатного буфера.
Приготовленные разведения должны быть использованы в течение 45 мин после их приготов
ления.
6.4.2 Из проб продуктов, подготовленных по 6.3.1 и 6.3.2. отбирают стерильной пипеткой 10 см3и
вносят в 90 см3стерильных растворов хлористого натрия или фосфатного буфера. Получают разведение
1:10. Из первого разведения 1:10 готовят ряд последующих разведений 1:100.1:1000 ит.д.
Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 ит.д.. беря 1см3 предыдущего разведения
идобавляя его в пробирку с 9 см3раствора для разведений.
6.4.3Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку. При посеве на чашки
Петри посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. Вэтом случае пользуются одной
пипеткой.
6.4.4 К приготовленным навескам по (10.0 ± 0.1) г продуктов, подготовленных по 6.3.3, 6.3.4. 6.3.5.
добавляют 90см1стерильных растворовхлористого натрия или фосфатногобуфера, подогретых от40 °С
до45 °С. ивзбалтывают в течение 3—5 миндо возможно более полного эмульгирования. Получают разве
дение 1:10.
Из первого разведен ия 1:10 готовят последующие 1:100 ит.д.
6.4.5 В коническую колбу вместимостью 100см3 помещают (10.0 ± 0.1) г казеина, добавляют 90 см3
стерильного раствора двузамещенногофосфорнокислого калия по 6.2.8. имеющего pH 8.4 и подогретого
до температуры (37 ± 1)вС. Колбу помещают в водянуюбаню такой же температуры и выдерживают в
ней при периодическом встряхивании 20—25 мин.
Для приготовления последующих разведений казеина используют раствор двузамещенного фос
форнокислого калия с pH 7.4 по 6.2.8.
6.4.6 В коническую колбу вместимостью 100 см3помещают (10,0 ± 0,1) г сыра, подготовленного по
6.3.3. добавляют 90 см3стерильных растворов хлористого натрия, или лимоннокислого натрия, или фос
фатного буфера, подогретых от 40 еС до 45 *С. тщательно перемешивают до полного эмульгирования.
Получают разведение 1:10.
Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 ит.д.
6.4.7 Из расплавленных проб масла, мороженого, подготовленных по 6.3.6 и 6.3.7. отбирают сте
рильной пипеткой по (10,0 ± 0.1) см3и вносят в 90 см3стерильных растворов хлористого натрия или
фосфатного буфера, подогретыхот 40 5Сдо 45 ®С, ивзбалтывают в течение 3—5 мин до возможно более
полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.
Из первого разведения 1:10 готовят последующие 1:100 ит.д.
7 Условия проведения анализов
При выполнении анализов в лаборатории следуетсоблюдать следующие условия:
температура окружающего воздуха................................(20 ± 5) °С;
относительная влажность воздуха................................от 30 % до 80 %:
атмосферное давление.................................................... от 84 до 106 кПа.
8 Методы анализа
8.1 Метод определения уровня бактериальной обсемоненности сырого молока — редуктаз-
ная проба
В процессе жизнедеятельности бактерии выделяют в окружающую среду наряду с другими
окислительно-восстановительными ферментами анаэробные дегидразы. по старой классификации
называемые редуктазами. Существует зависимость между количеством мсзофильных аэробных и
факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) в молоке и содержанием в нем редуктаз, что
дает возможность использовать редуктазную пробу как косвенный показатель уровня бактериальной
обсемененности сырого молока.
8.1.1 Сущность метода
Метод основан на восстановлении резазурина окислительно-восстановительными ферментами, вы
деляемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности изменения окраски резазурина оценива
ют бактериальнуюобсеменность сырого молока.
11