ГОСТ Р 53185—2008
Т а б л и ц а 15 — Приготовление стандартных градуировочных растворов кофеина
№ п/п
Mi стандартного
раствора
Вместимость
мерной
колбы, см
3
Способ приготовления
Массовая
«опиемграция,
мг.’лм
1
1
1
(основной)
100
Навеску кофеина массой 100 мг помещают в мерную
колбу вместимостью
100
см3, до половины заполненную
дистиллированной водой, перемешивают до полного рас
творения вещества, доводят до метки и тщательно переме
шивают
400
2
2
25
Отбирают 10 см
3
раствора № 1. переносят в мерную
колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тща
тельно перемешивают
160
3
3
25
Отбирают 5 см ’ раствора № 1, переносят в мерную кол
бу, доводятдистиллированной водойдо метки и тщательно
перемешивают
80
4
4
25
Отбирают 1 см’ раствора № 1. переносят в мерную кол
бу, доводятдистиллированной водойдо метки и тщательно
перемешивают
16
П р и м е ч а н и е — Раствор N? 2 используют в качестве одного из контрольных растворов в повседневных
внализах, поскольку его массовая концентрация наиболее близка к среднему содержанию кофеина в анализиру
емых пробах.
4.8.4.2 Подготовка образца
Энергетический напиток наливают в химический стакан вместимостью 50 см3иудаляют газ в токе
азота. Аликвоту напитка в5 см3 помещают в мерную колбу вместимостью 250см3,доводятдистиллиро
ваннойводойдо метки, тщательно перемешиваютиотфильтровываютчерезбумажныйфильтрсразме
ром пор 0.5 мкм или через капроновый фильтр с диаметром лор 0,45 мкм.
4.8.5Проведение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
4.8.5.1 Приготовление подвижной фазы
150 см3ацетонитрила помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3,добавляют 10см3уксус
ной кислоты, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученный раствор
фильтруютчерезфильтровальную бумагусдиаметром пор0,5 мкм или черезкапроновыйфильтрсдиа
метром пор 0,45 мкм.
4 8.5.2 Условия хроматографическогоанализа
Условия ВЭЖХдля анализа кофеина:
подвижная фаза ацетонитрил: дистиллированная вода: уксусная кислота {15:84:1) в процентахпо
объему;
колонка по 4.8.3.2;
скоростьпотока 1,0 см3/мин;
детектирование: УФ при длине волны ).=272 нм;
вводимый объем пробы 10.0 мм3;
ориентировочное время удерживания кофеина (9,810,2) мин.
4.8.5.3 Построение градуировочной зависимости
Проводят хроматографическийанализ всех градуировочныхрастворов кофеина.
Регистрируют площади пиков и строят градуировочный график — зависимость площади пика от
массовой концентрации кофеина в градуировочном растворе.
Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством
поэксплуатации оборудования ируководством пользователя программным обеспечением.
Градуировочную зависимостьвыражают линейным уравнением
У = кх.(64)
Правильностьпостроения градуировочной зависимости контролируется величиной достовернос
ти аппроксимации (R2)
R2>0,9997.
Из уравнения (64) следует, что площадь пиков градуировочных растворов кофеина S (mV с или
V ■с)иихмассоваяконцентрация с(мг/дм3) находятсяв соответствующейфункциональнойзависимости
32