ГОСТ Р 53185—2008
4.8Метод определения кофеина
4.8.1 Сущность метода
Метод основан на идентификации и количественном определении кофеина (пуринового алкалои
да) с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением ультрафиоле
товогодетектирования.
4.8.2 Условия проведения анализа
При подготовке и проведении измерения должны быть соблюдены следующие условия:
температура окружающего воздуха.................................от 10 °Сдо 35 °С;
относительная влажность воздуха.................................от40% до 95%;
напряжение в электросети.............................................. 220’\™ В.
Помещение, гдепроводят работысреактивами, должнобытьобеспеченоприточно-вытяжной вен
тиляцией.
Все операции с реактивами следует проводить в вытяжном шкафу.
4.8.3 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы
Жидкостной хроматограф с насосом высокого давления с подачей растворителя от 0.1 до
5см3/мин.
Хроматографическаяаналитическаяколонка: длина колонки250 мм. диаметр 4,6 мм. заполненная
октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм.
Спектрофотометрический детектор на основе диодной матрицы, диапазон длин волн от 190 до
950 нм.
Микрошприц МШ-25для жидкостной хроматографии.
Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 с пределами допускаемой абсолютной погрешности одно
кратного взвешивания з.0.0001 г.
Колбы мерные наливные2-50-2,2-100-2.2-250-2.1-1000-2 по ГОСТ 1770.
Пипетки4-1-2-2 или 5-1-2-2.4-2-2-10 или 5-2-2-10,4-2-2-25 или 5-2-2-25 по ГОСТ 29227.
Ацетонитрил для ВЭЖХ.
Ледяная уксусная кислота х. ч. поГОСТ 19814.
Шкафсушильный, обеспечивающий нагревдо 150 °С.
Водадистиллированная по ГОСТ6709 или дистиллированная, фильтрованная через капроновый
фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Бумага фильтровальная с размером пор0.5 мкм по ГОСТ 12069.
Бумажные фильтры обеззоленные марки ФОМ.
Капроновый фильтрс диаметром пор 0.45 мкм.
Установка для фильтрования растворов.
Кофеин (1,3.7-триметилксантин) кристаллический массовой долей основного вещества не менее
99.0 % или подействующей нормативно-технической документации.
4.8.4 Приготовление растворов
4.8.4.1 Приготовление стандартных градуировочных растворов кофеина
Стандартные градуировочныерастворы кофеина готовятдля расчета градуировочнойзависимос
ти по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации к большей, из основного стандартного рас
твора No 1.
Стандартные градуировочные растворы кофеина хранятне более трех месяцев.
Для приготовления градуировочного раствора №> 1 (основного) навеску кофеина массой
40 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3,до половины заполненную дистиллированной
водой, перемешивают до полного растворения вещества, доводят до метки и тщательно перемеши
вают.
Для приготовления градуировочных растворов Ne№ 2—4 отбирают пипетками соответствующие
аликвоты градуровочного раствора Ne 1в соответствии с таблицей 15, помещают их в мерные колбы и
доводятдистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.
31