ГОСТ 32901—2014
При поверхностном способе посева перед выполнением анализа проводят подготовку пита
тельной среды. Для этого свежеприготовленную среду или среду после хранения, расплавленную на
водяной бане, охлаждают до {50,0
±
0.5) X и разливают в стерильные чашки Петри по 12 15 см3. Дно
чашки должно быть равномерно покрыто слоем среды высотой около 2 мм. Чашки оставляют полуот
крытыми для подсушивания на (60
±
5) мин в стерильных условиях (в боксе или специально обрабо
танном термостате). После подсушивания среды чашки закрывают, маркируют и используют для про
ведения анализа.
При поверхностном способе посева каждое из выбранных разведений засевают по 0,1 или
0.2 см3и равномерно по всей поверхности втирают посевной материал в питательную среду стериль
ным шпателем Дригальского.
При глубинном способе посева каждое разведение должно быть засеяно по 1 см’ в отдельную
чашку Петри и залито расплавленной и охлажденной до 45 °С средой. После внесения среды содер
жимое чашки тщательно перемешивают путем легкого вращательного движения для равномерного
распределения посевного материала. Чашки оставляют на горизонтальной поверхности для застыва ния
агара.
Допускается проведение двух параллельных определений, то есть проведение посева каждого
разведения на две чашки Петри.
8.5.2.3 Культивирование
После посева чашки Петри переворачивают крышками вниз и ставят в термостат с температу
рой (37
±
1) X на 16 24 ч. Подсчет колоний проводят через 24 ч.
8.5.2.4 Обработка результатов
При поверхностном посеве БГКП образуют розовато-фиолетовые колонии диаметром больше
0.5 мм с более светлым по сравнению с центром ореолом, которые подлежат подсчету.
При поверхностном посеве для пересчета результатов на 1 г или 1см3продукта число колоний,
выросших на каждой чашке Петри, умножают на 10 и на соответствующее разведение при посеве 0.1
см3; и умножают на 5 и на соответствующее разведение при посеве 0.2 см3.
При глубинном посеве БГКП образуют мелкие колонии до 0,5 мм красного цвета (вокруг коло
ний обычно образуется красный ореол), которые подлежат подсчету.
Подсчитанное число колоний, выросших на каждой чашке, умножают на соответствующее раз-
ведение.
Количество БГКП продукта вычисляют как среднеарифметическое по 8.4.3.1.
8.5.3 Метод дифференциации энтеробактерий на среде Эндо
8.5.3.1 Сущность метода
Метод основан на способности ферментирующих лактозу энтеробактерий (БГКП) образовывать
на среде Эндо темно-красные колонии с характерным металлическим блеском вследствие взаимо
действия образующихся альдегидов с фуксином в присутствии сульфита натрия при температуре
(37
±
1) еС в течение 24 ч. Метод предназначен для дифференциации энтеробактерий на
лактозоположи тельные (БГКП) и лактозоотрицательные (патогенные сальмонеллы и шигеллы) по
виду образуемых на среде колоний.
8.5.3.2 Проведение анализа
На среду Эндо делают посевы со среды Кесслер или других накопительных питательных сред с
признаками роста БГКП.
Пересев с накопительных сред на среду Эндо проводят в случае появления на накопительных
средах признаков роста в нормируемом разведении продукта.
Перед выполнением посева среду Эндо по 6.2.4.3 расплавляют на водяной бане (или пользу
ются свежеприготовленной средой), охлаждают до 50 X и разливают в стерильные чашки Петри
примерно по 10 - 12 см3, чтобы среда ровно покрывала дно чашки. Чашки со средой подсушивают в
термостате при температуре 37 °С - 45 X . расположив открытые чашки на стерильной бумаге в
пе ревернутом виде. Время подсушивания - 1ч. Допускается проводить подсушивание в боксе на
столе при включенных бактерицидных лампах. Затем чашки закрывают, маркируют и используют для
ана лиза.
Из пробирок и/или колбочек с накопительными средами с признаками роста БГКП. проводят по
сев петлей на среду Эндо. Анализируемый материал отбирают бактериальной петлей. Бактериаль
ную петлю кладут на поверхность питательной среды и проводят штрихи по поверхности среды, рас
полагая штрихи как можно ближе друг к другу для получения в конце штриха изолированных колоний.
Для выполнения нескольких посевов на одной чашке дно чашки предварительно делят на равные
сектора (рекомендуется не более 4 секторов).
8.5.3.3 Культивирование
Чашки с посевами переворачивают вверх дном и помещают в термостат при (37
±
1) X на 18-
24 ч.
17