ГОСТ Р 51352—2013
5.4.1.7Чувствительность
Значение чувствительности определяют следующим образом: в пробирки (от 8 до 10 шт.) вносят
нулевую калибровочную пробу и все компоненты изделия, предусмотренные инструкцией по его приме
нению. после чего проводят все процедуры определения. На основании полученных данных вычисляют
среднее квадратическое отклонение по формуле.
(7
м-1
(5)
где
В,—
значение скорости счета меченого соединения каждого измерения
в
пробирках с нулевой ка
либровочной пробой.
hmi
V
mhh
;
К—
среднее арифметическое значение скорости счета меченого соединения в пробирках с нуле
вой калибровочной пробой, имп/мин;
I—знак суммирования:
п
— число определений.
На оси ординат калибровочного графика откладывают значение (Во - 2<т) - если применяют прин
цип конкурентного связывания, или (В3+2а) - если используют сэндвич-вариант; из полученной точки
проводят прямую, параллельную оси абсцисс, до пересечения с калибровочным графиком; из точки пе
ресечения опускают перпендикуляр на ось абсцисс.
Соответствующая этому значению концентрация характеризует чувствительность, которую следу
ет выражать в значениях концентрации анализируемого вещества.
Значение чувствительности зависит от крутизны калибровочного графика в области низких кон
центраций. от точности определения нулевой калибровочной пробы, от константы ассоциации специфи
ческих антител (чем больше константа ассоциации, тем чувствительнее система для радиоиммунологи-
ческого анализа), а также от значения соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минималь
ным содержанием определяемого антигена и нулевой калибровочной пробы.
5.4.1.8Тест на «открытие» (метод добавок)
При постановке теста на «открытие» смешивают, как правило, равные обьемы контрольной сыво
ротки (плазмы) и калибровочной пробы. Вместо контрольной сыворотки (плазмы) можно использовать
калибровочную пробу с минимальной концентрацией определяемого вещества.
Тест на «открытие»
ОТ,
%. проводят в восьми-десяти повторностях. В исследуемой пробе опреде
ляют концентрацию анализируемого антигена и сравнивают ее значение с расчетным по формуле:
С
г ; г = - ^ х Ю 0(6)
сг
где Слр—полученное по калибровочному графику (практическое) значение концентрации анализируемого
антигена в исследуемой пробе;
Сг —расчетное (теоретическое) значение концентрации антигена в исследуемой пробе.
Значение «открытия» должно находиться в пределах от 90 % до 110 %.
Тест на «открытие» является одним из основных для решения вопроса о специфичности и пра
вильности проведения анализа. Важность данного теста заключается также и в том. что при его поста
новке сравнивают, как взаимодействуют анализируемый антиген, находящийся в исследуемой пробе
(например, в контрольной сыворотке или плазме), и анализируемый антиген, находящийся в калибро
вочной пробе, с антителом. Если они взаимодействуют по-разному, что называется «матриксным эф
фектом», то появляются систематические ошибки и непостоянство результатов определения.
В случае экспериментальной проверки изделий, предназначенных для определения антигена (ан
тител) в сухих пятнах крови, тест на «открытие» не проводят.
5.4.1.9Тест на «линейность»
Этот тест заключается в последовательных разведениях калибровочной пробы с максимальной
концентрацией антигена или контрольной сыворотки (плазмы) с высокой концентрацией этого антигена в 2,
4. 8 и т. д. раз (возможны и другие пропорции разведения) с последующим сравнением полученных
результатов с ожидаемыми при этих разведениях концентрациями анализируемого антигена. Разведе
ния должны быть выполнены с таким расчетом, чтобы тест охватывал все участки калибровочного гра
фика. поэтому наряду с максимальной калибровочной пробой можно использовать калибровочные про-
12