ГОСТ Р 51352—2013
изделия.
Значение специфического связывания определяют следующим образом: в пробирки (от 8 до 10
шт.) вносят нулевую калибровочную пробу и все компоненты реакционной смеси, после чего проводят
все процедуры, предусмотренные инструкцией по применению изделия.
В идеале значение специфического связывания должно быть близко к 50 %. Чем ниже этот пока
затель, тем меньше разрешающая способность калибровочной кривой изделия, поскольку калибровоч
ная кривая будет более пологой. При высоком значении Во/ТхЮО чувствительность изделия увеличива
ется, но «рабочий» отрезок калибровочной кривой уменьшается.
5.4.1.4Неспецифически связанная радиоактивность (неспецифическое связывание)
Неспецифическое связывание - это неспецифически связанная радиоактивность в образце при от
сутствии специфических антител.
Определение значения неспецифического связывания дает прежде всего информацию об эффек
тивности используемого метода сепарации свободной и связанной фракций и о неспецифическом захва те
свободного радиоиндикатора в связанной фракции. Причиной неспецифического связывания, прежде
всего, является неспецифическая сорбция свободного радиоиндикатора на стенках пробирок, на по
верхности осадка и сорбентов. Кроме того, неспецифическое связывание - это влияние перекрестных
реакций в анализируемых образцах в присутствии эндогенных антител и воздействие некоторых неспе
цифических факторов вследствие их присутствия в анализируемых образцах.
Поскольку неспецифическое связывание - одна из основных проблем радиоиммунологического
анализа, его исследование и контроль важны и необходимы. При этом значение неспецифического свя
зывания необходимо вычитать из значений полученных радиоактивностей для всех калибровочных
проб.
Неспецифическое связывание определяют следующим образом: в пробирки (от 8 до 10 шт.) вно
сят нулевую калибровочную пробу (или любую калибровочную пробу, или сыворотку крови человека) и
все компоненты изделия, предусмотренные инструкцией по его применению, за исключением антисыво
ротки (антител). Затем проводят все процедуры, предусмотренные инструкцией по применению изделия.
Значение неспецифического связывания Вн. %. рассчитывают по формуле:
Я н = у х 1 ° 0 ’(4)
где
В
—среднее арифметическое значение скорости счета в отдельных пробирках, имп/мин:
Т—среднее арифметическое значение тотальной радиоактивности, имп/мин.
Значение неспецифического связывания должно быть не более 5 %.
При использовании твердофазного метода значение неслецифического связывания не опреде
ляют.
5.4.1.5Соотношение скоростей счета калибровочных проб
Для оценки правильности работы системы для радиоиммунологического анализа необходимо
проводить определение соотношения скоростей счета (имп/мин) калибровочных проб. Значения скоро
стей счета калибровочных проб могут иметь прямую зависимость от концентрации анализируемого анти
гена (или антител): В0< ... < В.— (сэндвич-вариант), или обратную: В0> ... > B ^tc(метод конкурентного
связывания).
5.4.1.6Соотношение скоростей счета калибровочных проб с максимальным и минимальным
содержанием антигена (антител) и калибровочной пробы, не содержащей антиген (антитела)
Наклон калибровочной кривой в данной точке является одним из факторов, который определяет
разрешающую способность и точность системы для измерения соответствующей концентрации анали
зируемого антигена. Значение соотношения скоростей счета калибровочной пробы с минимальным со
держанием антигена и калибровочной пробы, не содержащей антиген [(В**„ - В* У(Во - В„) х 100). может
влиять на значение чувствительности системы для радиоиммунологического анализа. Соотношение же
скоростей счета калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена и калибровочной пробы,
не содержащей антиген [ ( В ^ - BJ/( В0- BJ х 100]. хотя и не отражает разрешающую способность от
дельных участков калибровочного графика, однако является одним из показателей стабильности систе
мы для радиоиммунологического анализа при сравнении разных изделий одной серии и изделий разных
серий.
Допускается определять соотношение скоростей счета калибровочной пробы с минимальным со
держанием антигена и калибровочной пробы с максимальным содержанием антигена [(В*,, - ВмУ(Вмац. -
Вн) х 100] и соотношение скоростей счета предпоследней калибровочной пробы (Впр) и калибровочной
пробы с максимальным содержанием антигена [(В.-р- BK)/(BVJM.- BJ х 100].
11