С. 5 ГОСТ 21237-75
После установления pH смесь переливают в бутыль с хорошо подобранной резиновой пробкой с
таким расчетом, чтобы ’Д часть бутылки оставалась свободной. Затем добавляют в количестве 1—3 %от
объема хлороформа (в холодное время года —меньше, чем в теплое), закрывают бутыль пробкой и
несколько раз встряхивают, после чего вынимают пробку для удаления избытка хлороформа и тут же
снова закрывают.
Через 1—2 ч после добавления поджелудочной железы или панкреатина проверяют реакцию,
устанавливают pH 7.4—7,6 и оставляют смесь для переваривания на 7—16суток при комнатной темпе
ратуредо образования аморфногоосадка.
Первые 3—4 суток переваривания ежедневно проверяют реакцию среды и поддерживают pH на
уровне 7,4—7,6. В течение этого времени встряхивают жидкость не менее трех раз в сутки так же. как
указано выше. Вдальнейшем встряхивать можно реже.
За 1—2 суток до окончания переваривания встряхивание прекращают, чтобы гидролизат отстоял
ся. Конец переваривания характеризуется следующими признаками: надне бутылки собирается аморф
ный осадок; жидкость над осадком просветляется и принимает соломенно-желтый цвет; гидролизат
легко фильтруется; реакция на триптофан с бромной водой должна быть положительной (в
пробирку наливают 3—4 см* фильтрованного гидролизата, добавляют три-четыре капли бромной
воды); при наличии триптофана жидкость принимаетрозово-фиолетовый цвет, вто время как
контрольная про бирка с гидролизатом без бромной воды имеет желтое окрашивание. 5 %-ный
гидролизат должен содержать 1.1—1,2 % общего азота. После гидролиза жидкость фильтруют через
полотняный или бу мажный фильтр, сливают в бутыль и стерилизуют в течение 30 мин при
температуре 120 *С.
Приготовленную среду можно хранить пять месяцев. Перед употреблением жидкостьфильтруют.
(Измененная редакция, Изм. № 2).
3.1.3. П р и г о т о в л е н и е б у л ь о н а Х о т т и н г е р а
К 100 см* основного раствора добавляют 500 см* водопроводной воды. 3 г хлористого натрия и
0,12 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Полученный раствор кипятят втечение 10 мин, филь
труют, устанавливают pH 7,2—7,4 и стерилизуют втечение 20 мин при температуре 120 "С.
3.1.4. П р и г о т о в л е н и е ф и з и о л о г и ч е с к о г о р а с т в о р а
В 1000см*дистиллированной воды растворяют 8,5 г химически чистого хлористого натрия. Ра
створ доводят до кипения, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы или
пробирки и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120 *С.
3.1.5. П р и г о т о в л е н и е с р е д ы Л е в и н а
К 100 см’ расплавленного мясо-пептонного агара с pH 7,0—7,4, приготовленного по п. 3.1.1,
добавляют 2 см*0,5 %-ного водного раствора предварительно подогретой на водяной бане метиленовой
сини, 1,5 см* 2 %-ного раствора эозина (бактериологического), 2 г лактозы и 0.2 г двузамещенного
фосфорнокислого калия. Растворы красок готовят на дистиллированной поде и стерилизуют 1ч при
температуре 100*С. Посте добавления всех компонентов в указанном порядке среду тщательно переме
шивают. разливают в чашки и подсушивают. Среда должна иметь красно-фиолетовый цвет.
Среда Левина может быть приготовлена из сухой стандартной среды по прописи, указанной на
этикетке.
3.1.6. Среды фуксин-сульфитный агар (среда Эндо), бактоагар Плоскирева, висмут-сульфит агар
(среда Вильсон-Блера) могут быть приготовлены из сухихстандартных сред по прописи, указанной на
этикетке.
3.1.7. П р и г о т о в л е н и е с р е д ы М ю л л е р а
Для приготовления среды Мюллера вначале готовят растворы серноватистокислого натрия и
Люголя.
В мерный цилиндр с 50 гсерноватистокислого натрия добавляют до НЮ см* дистиллированной
воды. Раствор переливают вбутыль и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Для приготовления раствора Люголя в 100см*дистиллированной воды растворяют 25 г металли
ческого йода. 20 г йодистого калия.
Для приготовления среды Мюллера встерильные флаконы помешают по 4.5 г мела и стерилизу
ют их сухим паром в течение 1ч. Затем наливают в каждый флакон по 90 см* бульона из перевара
Хоттингера, содержащего 0.13—0,15 %аминного азота, устанавливают pH 7,2—7,4 и стерилизуют при
температуре 120*С. После стерилизации вновь устанавливают pH 7,2—7,4. для чего проверяют в
одном из флаконов и определяют необходимый для подтнтровки данного количества среды объем
соляной кислоты шли гидроокиси натрия. Затем васептических условиях перед употреблением
добавляют по 2 см* раствора Люголя и по 10см* раствора серноватнстокислого натрия.
(Измененная редакция, Изм. № 2).