ГОСТ 21237-75 С. 16
Подозрительные колонии бактерий сальмонелл исследуют вследующем порядке: из части коло
ний приготовляют мазок и окрашивают по Граму, затем проподят исследование на подвижность.
Бактерии сальмонеллы, как и псе бактерии семейства кишечных, представляютсобой палочки с
закругленными концами, неспорообразуюшие, в большинстве подвижные (S. pullorum и S. gallinarum
неподвижные), окрашивающиеся по Граму отрицательно.
Оставшуюся часть колонии растирают вконденсационной воде скошенного агара или водной-
двух каплях добавленного к агару стерильного бульона. Полученная взвесь служит исходным материа
лом для дальнейшего исследования.
Часть взвеси испытывают в реакции агглютинации на предметном стекле. Реакцию ставят с
поливалентной адсорбированной агглютируюшей О-сывороткой групп Л. В, С. D и Е. В качестве
контроля применяют кашлюфизиологического раствора.
Для проведения реакции агглютинации на предметное стекло наносят каплю поливалентной
адсорбированной сыворотки и рядом каплю физиологического раствора. Затем бактериологической
петлей захватывают часть взвеси и растирают ее в капле сыворотки, начиная с края капли, постепенно
захватывая всю каплю. Петлю обжигают, захватывают петлей еще взвеси и вносят в каплю физиоло
гического раствора (контрольного), также растирая до получения равномерной взвеси.
При положительной реакции через 1—2 мин в капле сыворотки образуются хлопья или комочки,
а сама жидкость просветляется, что особенно заметно при покачивании стекла.
В физиологическом растворе (контрольном) наблюдается равномерная муть.
При получении положительной реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной сыво
роткой проводят реакцию агглютинации на стекле с адсорбированными монорецепторными О-сыво-
ротками. Следует начинатьс более распространенных групп В. С, D и Е, в частности, в группе В с IV,
в группе D с IX. в группе С с VII, в группе Е с III, X.
При отрицательной реакции агглютинации с одной колонией дополнительно исследуют еще не
менее трех-четырех колоний.
При характерном росте на дифференциальной среде, избирательной положительной реакции
агглютинации с монореиепторной О-сывороткой и при наличии подвижных грамотрииательных пало
чек дается предварительное заключение о том, что выделенная культура относится к сальмонеллам.
Одновременно с реакцией агглютинации материал засевают на трехсахарный агар Крумвиде-
Олькеницкого в модификации Ковальчука, приготовленной по п. 3.1.13.
Посев на трехсахарный агар делают сначала штрихом по скошенной поверхности, а затем уколом
в глубину столбика. Среду инкубируют в термостате в течение 16—18 ч. При наличии сальмонелл
янтарный цвет среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука изменяется следующим
образом: столбик —желто-бурый, скошенная поверхность цвет не изменяет. По наличию трещин
и разрыву столбит» агара устанавливают образование газа, по изменению окраски столбика
(почерне ние) —наличие сероводорода.
Сальмонеллы, не образующие сероводорода, изменяют цвет столбика агара вжелтый цвет. Бакте
рии. не относящиеся к сальмонеллам, расщепляющие мочевину, окрашивают столбик и скошенную
поверхность в ярко-красный цвет, а бактерии, сбраживающие лактозу и сахарозу, изменяют цвет
среды всиний.
Если культуры ферме»гтируют лактозу и глюкозу с образованием газа и расщепляют мочевину,
они не принадлежат к бактериям рода сальмонелл.
Культуры, не ферментирующиелактозу исахарозу и не расщепляющие мочевину, но ферменти
рующие глюкозу (с образованием газа) подвергают дальнейшему исследованию, для чего культуру со
среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука исследуют с монореиепторной О-сыво
роткой (материал берут с верхней части скошенной поверхности). Затем эту культуруагглютинируют с
монорецепторными Н-сыворотками, сначала с первой фазой, затем со второй фазой Н-антигена.
входящего вданную группу (для агглютинации с Н-сыворотками культуру берут ближе к конденса
ционной жидкости в пробирке, где особи более подвижны) и устанавливают серологический тип
сальмонелл.
Если культуры дают отрицательные результаты агглютинации с монорецепторными О-сыворот-
ками, но при характерном росте на элективной среде и соответствующих морфологических признаках
(грамотрицательные подвижные палочки) делают посев на среды с углеводами:
в короткий пестрый ряд (включая среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом). В бульон
Хоттингера для определения образования индола и сероводорода под пробку в пробирку с бульоном
помещают индикаторные бумажки, приготоаленные по пп. 3.1.25 и 3.1.26.
Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 “С в течение 18—20 ч. после чего их
просматривают под микроскопом.