С. 11 ГОСТ 21237-75
Наличие в мазках грамположительных палочек с обрубленными концами, а при окраске сафра
нином или раствором Регибера —палочек или цепочек с капсулами или теней в мазках из лимфати
ческих узлов свиней соспецифическойдля сибирской язвы патологической картиной, дает предвари
тельное заключение об обнаружении (бактерноскопически) микробов, характерныхдля возбудителя
сибирской язвы.
При наличии в мазках атипичных бацилл одновременно с бактериоскопией ставят реакцию
преципитации.
В зависимости от результатов бактериоскопии и характера роста на питательных средах проводят
исследования на наличие определенных микробов.
4.2. Методы выявления аэробных бактерий
4.2.1. В ы я в л е н и е б а ц и л л с и б и р с к о й я з в ы
4.2.1.1 Сущность метода выяатения бацилл сибирской язвы заключается вопределении их харак
терной морфологии, вопределении характера роста на питательных средах и выявлении патогенности
путем заражениялабораторных животных.
4.2.1.2. Проведениеисследования
Бацилл сибирской язвы обнаруживают втри последовательных этапа: бактериоскопия мазков из
патологического материала; получение и изучение свойств чистой культуры на питательных средах;
биологическая проба на лабораторных животных и, при необходимости, серологическое исследование.
При бактериоскопии мазков из патологического материала обращают внимание на форму и
расположение отдельных микробов и наличие капсул. Характерный вид сибиреязвенных палочек и
обилие их в мазке нередко позволяет поставить диагноз уже по результатам бактериоскопического
исследования.
Бациллы сибирской язвы на чашках с мясо-пептонньш агаром через 16—24ч растут в виде серо
белых шероховатых с бахромчатыми краями колоний, напоминающих под лупой или при малом
увеличении микроскопа «головку медузы», «львиную гриву*. Из подозрительной колонии делают
посев в пробирку с мясо-пептонным бульоном.
На мясо-пелтонном бульоне сибиреязвенные бациллы растут в виде крупных хлопьев, оседаю
щих на дно пробирки к концу первых суток, с образованием осадка, напоминающего комок ваты,
бульон остается прозрачным.
Избульонной культуры готовят препарат «раздавленная» или «висячая капля*. При микроскопи-
ровании препарата обнаруживаются неподвижные сибиреязвенные палочки.
При необходимости дифференциации сибиреязвенных бацилл от сапрофитных бацилл, которые
морфологически очень сходны, выделенную чистую культуру на мясо-пептонном агаре или мясо-
пептонном бульоне исследуют: на тест «жемчужное ожерелье», чувствительность к сибиреязвенному
фагу, свертываемость желтка куриного яйца, гемолитическую активность, капсулообразование.
Т е с т « ж е м ч у ж н о е о ж е р е л ь е * осуществляют одним из двух способов:
Первыйспособ. Постановку теста начинают с разведения пенициллина поп. 3.1.23. Втри пробир
ки с мясо-пептонным агаром, в каждой из которых содержится по 0,5 и 0,05 ед. пенициллина в 1см*
(по п. 3.1.24). и в контрольную пробирку без пенициллина вносят по 0,25 см’ трехчасовых бульонных
культур испытуемых штаммов, выращенных втермостате при температуре 37 *С. Посевы помещают в
термостат в наклонном положении (на деревянную рейку или стеклянную трубку) при температуре 37
’С. Через 3 ч из конденсационной жидкости берут бактериологической петлей материал и готовят на
предметных стеклах мазки, которые высушивают на воздухе, фиксируют в течение 15 мин спирто-
эфирной смесью и окрашивают метиленовой синыо. разведенным фуксином или по Граму.
Второй способ. К мясо-пептонному бульону (pH 7,2—7.4) стерильнодобавляют 20 % сыворотки
крови крупного рогатого скота без консерванта. Для этого берут три пробирки, в каждой из которых
содержится по Nсм’ мясо-пептонного бульона, и добаатяют в каждую пробирку 2,0 см* сыворотки
крови крупного рогатого скога. В первую пробирку добавляют0.5 см* пенициллина, содержащего 10ед. в
I см* раствора, получают бульон, содержащий в 1 см* 0.5 ед. пенициллина; во вторую пробирку
добавляют 0,5 см’пенициллина из пробирки, содержащей 1ед. пенициллина в I см* раствора: в третью
пробирку пенициллина не добаатяют. в ней остается мясо-пептонный бульон с сывороткой крови
(контрольная). Бульон с сывороткой крови и пенициллином рахтивают в стерильные пробирки по
2,5 см’ и вносят в каждую из них по 0,25 см’ трехчасовой бульонной культуры, выращенной в
термостате при температуре 37 *С. испытуемых штаммов. Для контроля производят посев вбульон с
сывороткой крови без пенициллина.
Мясо-пептонный бульон перед посевом нагревают на водяной бане до температуры 40 ‘С. и
засеянные пробирки выдерживают втермостате при температуре 37 *С в течение 3—6 ч.