ГОСТ 21237-75 С. 22
Затем сыворотку отмывают, погружая мазки в кювету, содержащую физиологический раствор с
фосфатным буфером pH 7.4 на 20 мин. Раствор в кювете периодически помешивают и меняют через
К) мин.
Отмытые мазки ополаскиваютдистиллированной водой и высушивают на воздухе.Для быстроты
высушивания можно использовать вентилятор.
4.3.4.1. На поверхность мазка наносят небольшую каплю глицерина с буфером pH 8,0, накрыва
ют покровным стеклом, излишек глицерина удаляют.
На покровное стекло наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло или его заменитель и
производятлюминесцентную микроскопию.
4.3.4.2. Диагностическая опенка интенсивности свечения возбудителей рожи свиней илистериоза:
«+ + + +» —яркая, сверкающая зеленая люминесценция морфологически типичных бактерий с
более интенсивным свечением по их периферии (положительная);
«*++ + » _ отчетливо выраженная, достаточно яркая, зеленоватая люминесценция морфологи
чески типичныхбактерий с более интенсивным свечением по их периферии (положительная);
«+ +* —недостаточно яркая желтовато-зеленоватая люминесценция, периферический ободок
выяшяется с трудом (сомнительная);
«+* — люминесценция очень слабая, морфология бактерий различается с трудом (отрицатель
ная);
«—» —люминесценция отсутствует, видны лишь тени бактерий (отрицательная).
Видовую принадлежность обнаруженного возбудителя устанавливают поопределенной сыворот
ке. которая вызывает специфическое свечение исследуемой культуры интенсивностью не менее чем на
три креста.
4.3.5. П р о в е д е н и ел ю м и н е с ц е н т н о - с е р о л о г и ч е с к о г ои с с л е д о
в а н и яб а к т е р и йр о ж ис в и н е йи л и с т е р и о з ав м я с е и п а р е н х и
м а т о з н ы х о р г а н а х
Материалдля исследования должен быть свежим. Для люминесцентной микроскопии из паренхи
матозных органов готовят взвесь на физиологическом растворе хлорида натрия в соотношении 1:5.
После осаждения крупных частиц взвеси из разных участков ее поверхности готовят подва-три мазка на
каждый вид сыворотки.
Обработку препаратов я люминесцентную микроскопию проводят так, как указано при исследо
вании культур (п. 4.3.4.1).
4.3.6. Д и а г н о с т и ч е с к а яо ц е н к аи н т е н с и в н о с т и с в е ч е н и я б а к
т е р и й р о ж и с в и н е й и л и с т е р и о з а
При обнаружении возбудителя с типичной морфологией, специфическим свечением и интенсив
ностью не ниже чем на три креста, ставят положительный люминесцентно-серологический диагноз
соответственно той сыворотке, которая вызвала свечение возбудителя.
При сомнительных или отрицательных результатах (слабое свечение на один или два креста,
свечение микробов с атипичной морфологией или отсутствие свечения возбудителя в мазках) диагноз
уточняютлюминесцентной микроскопией культур, выделенных из посевов патологического материа
ла.
4.3.7. П р о в е д е н и е л ю м и н е с ц е н т н о - с е р о л о г и ч е с к о г ои с с л е д о
в а н и я с а л ь м о н е л л
Для исследования могут быть использованы мазки-отпечатки из органов и тканей, пробы мяса
после подрашивания втермостате в течение 4—6 ч. а также мазки, приготовленные из бактериальных
культур (как чистых, так и смешанных).
Сухуюфлуоресцирующуюсальмонеллезную сыворотку и альбумин, меченый родамином, перед
применением растворяют каждый в отдельности дистиллированной водой в объеме, указанном на
этикетке ампулы.
При использовании сыворотки совместно с альбумином для приготовления рабочей смеси, флу
оресцирующую сальмонеллезную сыворотку и альбумин, меченый родамином, разводят каждый в
отдельности 0.15 моль/дм1раствором хлористого натрия (pH 7,2—7.4) на одно разведение меньше, чем
их рабочие титры, указанные на этикетках препаратов. Разведенную флуоресцирующую сыворотку и
альбумин, меченый родамином, смешивают в равных объемах. Рабочую смесь хранят в пробирке с
плотной резиновой пробкой в темном месте при температуре 4 ’С.
13
-
2-2264