С. 23 ГОСТ 21237-75
1
4.3.7.1. Проведение люминесцентно-серологического исследовании со>ьмонем в культуре пряным
способом
Исследованию подлежат молодые, чистые или смешанные культуры, выращенные в жидких или
лучше на плотных элективных средах после появления макроскопически видимого роста.
Издвух-трех типичных для сальмонелл колоний готовят мазки на предметных стеклах соответ
ственно числу сывороток, которые должны быть применимы для исследования.
Препараты помещают в чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой на дне. на каждый
мазок наносят одну-две капли сыворотки в рабочем разведении или сыворотку с дтьбумином, мече
ным родамином, сыворотку распределяют по всей поверхности мазка и выдерживают при комнатной
температуре в течение 30 мин или втермостате при температуре 37 ’С в течение 15мин. Затем сыворот
куотмываютдважды по 10 мин 0,15 моль/дм3 раствором хлористого натрия. Отмытые мазки ополаски
вают дистиллированной водой и высушивают на воздухе или в термостате.
Обработку и микроскопию мазков производят по п. 4.3.4.1.
4.3.7.2. Проведениелюминесцентно-серологического исследования сальмонелл в мясе и паренхима
тозных органах прямым способом
В свежих пробах при отсутствии патологических изменений типичные формы сальмонелл можно
обнаружить в редких случаях. Поэтому люминесцентную микроскопию проводят после накопления
сальмонелл. Для этого от всех органов отрезают кусочки размером 2 34 см и помешают их в закры
тых чашках в термостат на 4—6 ч дзя подращивания: их исследуют при отрицательном результате
первичной микроскопии.
Готовят две серии мазков-отпечатков (по три мазка в каждой серии). Одну серию мазковокраши
вают по Граму и исследуют по общепринятой методике. Вторуюсерию окрашиваютлюминеспирую-
шими сальмонеллезнымн сыворотками или смесью люмннесцирующей сальмонеллезной сыворотки с
дтьбумином, меченым родамином. Окраску ведут аналогично окраске сальмонелл в культуре.
Обработку и микроскопию производят по п. 4.3.4.1.
4.3.7.3. Диагностическая оценка интенсивности свечения сальмонелл
При микроскопии мазков из культуры или мазков-отпечатков из органов и тканей бактерии
сальмонелл дают яркое изумрудно-зеленоватое свечение по периферии бактерий с хорошо выражен
ной центральной темной зоной. Фон препарата темный с оранжево-красным окрашиванием посторон
ней микрофлоры, тканевых элементов и других органических частиц (при применении альбумина,
меченого родамином), содержащихся в исследуемых препаратах.
Характерное свечение контура (ободка) при визуальном осмотре оценивается в крестах:
«+ + + + •—сияющее зеленовато-желтоватое свечение;
«*++ +» — яркое желтовато-зеленоватое свечение;
«+ +* —умеренное желтовато-зеленоватое или беловатое свечение отчетливо заметного контура;
«+* — слабое беловатое свечение различимогоконтура;
«—<*— клетки в виде сероватых теней, контур отсутствует или слабо заметен на отдельных
участках периферии клеток (не у всех микробов).
4.3.7.4. Положительным результатом обнаружения сальмонелл считается свечение типичныхдля
сальмонелл форм, оцениваемое не ниже чем на два креста при условии, что в контрольных препара
тах, окрашенных рабочим разведением гетерологической сыворотки, оно оценивается отрицательно, а
также при отрицательных результатахокрашивания сальмонеллезными флуоресцирующими сыворот
ками гетерологических бактерий (кишечной палочки, протея).
Свечение на один крест оценивается как сомнительное, и исследование повторяют.
4.3.7.5. Проведение люминесцентно-серологического иссле<к>вания сальмонелл в культурах, мясе и
паренхиматозныхорганах непрямым способом
Люминесцентно-серологическое исследование состоит издвух этапов.
Первый этап. Обработка мазков из культур, мазков-отпечатков иммунной сывороткой.
После фиксации мазков этиловым спиртом, на мазки из культур или мазки-отпечатки из мяса
или органов наносят пастеровской пипеткой одну-две капли поливалентной сальмонеллезной сыворот
ки. разведенной физиологическим раствором 1:32. Мазки помещают вчашки Петри с влажной филь
тровальной бумагой и выдерживают 30 мин при комнатной температуре или 15мин при
температуре 37 *С.
Несвязавшуюся иммунную сыворотку отмывают 5 мин водопроводной водой, мазки высушива
ют на воздухе или втермостате при температу ре 37 *С.