С. 21 ГОСТ 21237-75
Применение методалюминесцирующих сывороток для идентификации выделенной культуры
микробов имеет целью ускорение исследования, исключающего в ряде случаев определение культу
ральных и биохимических свойств, серологические реакции и тин прованне.
4.3.2. А п п а р а т у р а , м а т е р и а л ы и р е а к т и в ы
При проведении исследования применяют дополнительно аппаратуру, материалы и реактивы,
кроме указанных в разд. 2:
микроскоп люминесцентный или люминесцентное устройство ОИ-17 с приставкой к биологи-
ческому микроскопу;
сыворотки против рожи свиней флуоресцирующие;
сыворотки противлистерноза серотипов 1,4а, 46. флуоресцирующие;
сыворотки флуоресцирующие групповые и комплексные сальмонеллезные;
сыворотка поливалентная сальмонеллезная;
сыворотка (меченая ФИ’ГЦ) против гамма-глобулинов кролика, ослиная;
альбумин из крови крупного рогатого скота, меченый родамином;
масло нефлуоресцирующее иммерсионное или его заменитель, изготовленный издиметилфгалата
чистого —100см’, нафталина сублимированного — 1,75 г или тимола чистого —5 г;
глицерин с фосфатным буфером (в разведении 9:1 pH буфера 8,0);
раствор физиологический с фосфатным буфером, pH 7.4.
4.3.3. П о д г о т о в к а к и с с л е д о в а н и ю
Приготовление физиологического раствора с фосфатным буфером.
На аналитических весах отвешивают 9.078 гх.ч. однозамещениого фосфата калия, помешают его
в мерную колбу и доводят дистиллированной водой до 1000 см’. Затем отвешивают 11,876 гдвузаме-
шенного фосфата натрия и в другой мерной колбедоводятдистиллированной водойдо объема 1000см’.
При использовании двузамещенного фосфата натрия, содержащего 12молекул поды, для получения
1000 см’ раствора берут навеску массой 23,752 г, а безводного реактива — 9.476 г. Для получения
буфера с pH 7.4 смешивают четыре части раствора двузамещенного фосфата натрия и одну
часть раствора однозамещениогофосфата калия. Полученный буфер добавляют к физиологическому
раство ру всоотношении 1:50.
Если при смешивании фосфатов (4:1) не получают pH 8.0, то изменяя соотношение растворов,
достигают необходимой величины pH (при повышенной кислотности добавляютдвузамешенный фос
фат натрия, а при щелочном pH добавляют однозамешенный фосфат калия).
Если при добавлении буфера в соотношении 1:50 к физиологическому раствору последний будет
иметь pH ниже 7,4. то увеличением количества добавленного буфера добиваются нужной реакции
физиологического раствора.
4.3.4. П р о в е д е н и ел ю м и н е с ц е н т н о - с е р о л о г и ч е с к о г ои с с л е д о
в а н и я в о з б у д и т е л е й р о ж и с в и н е й и л и с т е р и о з ав к у л ь т у р е
Для исследования используют 18—24-часовые чистые или смешанные культуры, из которых
готовят по три мазка на отдельных предметных стеклах. Один из мазков используют для обработки
рожистой люминееннруюшей сывороткой, два других —для обработки листериозными люминесниру-
ющими сыворотками (серотипов I. 4а. 46).
Перед применением флюоресцирующую сыворотку разводят физиологическим раствором с фос
фатным буфером (pH 7.4) до рабочего разведения, указанного на этикетке ампулы. Сыворотки в
рабочем разведении могут храниться при температуре 2—4 ’С втечение 2суток.
Мазки готовят средней густоты (несколько десятков микробов в поле зрения микроскопа) раз
мером не более 1см-’.
Место нанесения культуры очерчивают карандашом по стеклу с обратной стороны, подсушивают
мазки на воздухе, маркируют и фиксируют этиловым спиртом втечение 15мин; мазки для фиксации
погружают в вертикальном положении в стеклянный сосуд со спиртом. Каждое стекло отделяют метал
лической проволочкой или стеклянной соломкой.
После фиксации и испарения спирта мазки ополаскивают физиологическим раствором с фосфат
ным буфером (pH 7,4). На слегка подсушенный мазок наносят одну-две капли соответствующей л юми-
несцирующей сыворотки в рабочем разведении.
Мазки с сывороткой помешают во влажную камеру (в чашки Петри с влажной фильтровальной
бумагой на дне) и выдерживают в термостате при температуре 37 *С втечение 30 мин.
Допускается мазки ополаскивать физиологическим раствором или дистиллированной водой без
фосфат! югобуфера.