ГОСТ 21237-75 С. 12
Дальнейший ход исследования проводят втой же последовательности, которая изложена в пер
вом способе.
Вслучаях отрицательных результатов микроскопии через 3 ч инкубации посевов (на мясо-пептон-
ном агаре и мясо-пептонном бульоне) следует продолжить инкубацию до 6 ч и после этого провести
заключительный учет теста.
При положительной реакции теста «жемчужное ожерелье» бациллы сибирской язвы образуют
цепочки шарообразной формы, которые приобретают сходство с ожерельем из бус. Споровые сапро
фитные аэробные бактерии, как правило, не образуют шарообразных форм, а имеют обычную форму
палочек, т. е. дают отрицательный результат при постановке этого теста.
Л и з и с с и б и р е я з в е н н ы м ф а г о м « Га мма MBA* осуществляют одним из двух
способов:
Первый способ. На поверхности пластинки с мясо-пептонным агаром (pH 7,2—7,4) в чашке
Петри стерильной пробиркой с ровными краями делают 5—6 насечек. Бактериологической петлей или
стерильной пастеровской пипеткой с тонко оттянутым концом на поверхность агара в центр насечки
(кружка) наносят одну каплю трехчасовой бульонной культуры испытуемых штаммов. Внесенную
каплю распределяют равномерно петлей по всей поверхности насечки. Засеянные чашки подсушивают
в течение 15—20 мин при температуре 37 *С, после чего в центр каждого посева наносят каплю
неразведенного фага, вновь подсушивают в течение 10 мин при температуре 37 ‘С, и затем чашки
помешают в термостат при температуре 37 *С.
Через 6—8 ч в месте посева можно обнаружить стерильное пятно, в контрольных чашках все
насечки покрыты культурой, как и в чашках, в которых испытывались сапрофитные спорообразую-
шие аэробные бактерии.
Второйспособ —способ «стекающей капли». Исследуемую культуру высевают втри пробирки на
скошенный мясо-пептонный агар и выдерживают в термостате при температуре 37"С не более 20 мин.
Пробирки ставят вертикально в штатив. Затем на верхнюю часть агара наносят каплю неразведенного
бактериофага. Одну пробиркуоставляют для контроля безфага. Действие фага устанавливают через 6— 8
ч. В контрольной пробирке по всей поверхности агара наблюдается обычный рост культуры. В пробир ках
с фагом по ходу стекаиия капли микробы не растут, а вокруг этой зоны наблюдается обычный рост
культуры в виде «бордюра».
Наиболее четко явление лизиса наблюдается через 16—18 ч.
С в е р т ы в а е м о с т ь ж е л т к а к у р и н о г о я й ц а определяют следующим образом.
Испытуемую культуру высевают в пробирку со средой ДрожжевкиноЙ, приготовленной по п.
3.1.21. Посевы помешают втермостат при температуре 37 “С на время от 8 до 24 ч. За указанное время
сибиреязвенная палочка не вызывает коагуляцию желтка куриного яйца, а большинство спорообразу-
юших аэробных бактерий коагулируют желток уже через 6—8 ч.
Гемолитическую акгивностьопределяют следующим образом.
Испытываемую культуру высевают на чашку с мясо-пептонным агаром с кровью или в пробир
ку бульона с кровью. Чашку или пробирку помешают в термостат при температуре 37 "С на 20—24 ч.
При наличии бацилл сибирской язвы на чашке вырастают характерные колонии без гемолиза,
бульон с кровью также не гемолизируется. При наличии других сапрофитных спорообразующих ба
цилл, в большинстве случаев, вокруг колоний образуется зона {3-гемолиза и наступает гемолиз бульо на
с кровью.
О п р е д е л е н и е к а п с у л о о б р а з о в а н и я in vitro.
Испытуемую культуру петлей высевают в пробирку со средой *ГКИ», приготовленной по п.
3.1.20, пробирку помешают втермостат при температуре 37 *С. Через 30—120 мин уотдельных сибире
язвенных палочек начинается капсулообразование, а через 16—18 ч все или большинство сибиреязвен
ных бацилл образуют капсулу. Со среды готовят мазки, фиксируют их 15мин вметаноле и окрашива ют
синью Леффлера в течение 15 мин. При микроскопии обнаруживают синие палочки и нити,
окруженные розовой капсулой.
Одновременно с бактериоскопией исходного материала в сомнительных случаях производят ре
акцию преципитации.
П о с т а н о в к а р е а к ц и и п р е ц и п и т а ц и и
2 г материала мелко нарезают в пробирку и заливают 10 см’ карбонизированного 0,5 %-ного
физиологического раствора. Если исследуют свежий материал, то его предварительно выдерживают в
термостате втечение 18—24 ч при температуре 37 ‘С. Затем экстракт кипятят в течение 30—40 мин и
фильтруют через асбестовую нейтральную вату до полной прозрачности. 0,25-0,3 см’ прозрачного
экстракта вносят в узкую пробирку и под него подслаивают такое же количество преципитируюшей
сибиреязвенной сыворотки, профильтрованной через бумажный фильтр.
14*