ГОСТ 21237-75 С. 24
Второй этап. Окраска мазков из культур, мазков-отпечатков люминесцирующей сывороткой
против гамма-глобулина кролика (меченого ФИТЦ) или смесыо сыворотки с альбумином, меченым
родамином.
При окраске смесьюлюминесцирующей сыворотки против гамма-глобулина кролика (меченого
ФИТЦ) или смесыо люминесцирующей сыворотки с альбумином, меченым родамином, готовят
рабочую смесь, как указано в п. 4.3.7.
Обработку и микроскопию мазков производят по п. 4.3.4.1. Диагностическуюоценку интенсив
ности свечения производят по п. 4.3.7.3.
4.4. Метод выявления анаэробных бактерий
4.4.1. Сущность метода выядления анаэробных бактерий заключается вопределении ихспособно
сти расти в отсутствии кислорода воздуха, морфологии возбудителей, роста на питательных средах и
на выяаленин патогенности возбудителей путем заражения лабораторных животных.
Удоатетверительные анаэробные условия создаются в жидкой питательной среде, где в качестве
восстановителя применяют мясо, печень, которые одновременно служат и источником питания.
Средадолжна быть фасована во флаконы или пробирки таким образом, чтобы плошать поверх
ности среды по абсолютной величине не превышала ’/1(,ееобъема, и поверхность ее была изолирована
от кислорода воздуха.
Исследование на анаэробные бактерии проводят при подозрении на следующие заболевания:
эмфизематозный карбункул (эмкар), злокачественный раневой газовый отек, брадзот овец, дизенте
рию ягнят, энтеротоксемию овец, столбняк, некробактсриоз, ботулизм.
4.4.2. П р о в е д е н и е и с с л е д о в а н и я
Материалом для исследования при эмкаре и злокачественном раневом газовом отеке яатяются
кусочки пораженных мышц, отечные ткани, лимфатические узлы, печень и селезенка: при брадзоте
овец —кровь из сердца, слизистая оболочка сычуга и тонкого отдела кишечника, инфильтрат под
кожной клетчатки; при дизентерии ягнят и энтеротоксемин овец — содержимое кишечника, поражен
ная почка; при столбняке —раневой секрет, гной, кусочки тканей, которые берут из глубоких слоев
пораженных участков; при пекробактериоэе —некротические фокусы паренхиматозных органов; при
ботулизме — содержимое желудка, толстых кишок, селезенка, кусок печени и головной мозг.
Диагноз на анаэробные инфекции ставят на основании бактериоскопии, посева материала и
биопробы на животных.
Для бактериоскопии из материала готовят несколько мазков или мазков-отпечатков, которые
окрашивают метиленовой синью или по Граму.
При просмотре мазков обращают внимание на форму, расположение отдельных микробов, нали
чие и расположение спор, наличие капсул и отношение к окраске по Граму.
Для посева материал обжигают и навеску массой 10 г растирают в стерильной ступке с добавле
нием двойного количества физиологического раствора.
По 3—5 см* приготовленной взвеси засевают в четыре большие пробирки с мясной средой типа
Тароцци, залитой слоем вазелинового масла толщиной 0,5 см, предварительно прогретой в кипящей
водяной бане в течение 20-30 мин, а затем быстро охлажденной до температуры не ниже 50 “С.
Посевы перед тсрмостатнроаанием прогревают для всех указанных анаэробовдве пробирки при темпе
ратуре 80*Свтечение 20мин; при исследовании на Cl. botulinum типа Е одну пробирку при температу ре
60 ’С в течение 15 мин (при этом сохраняются споры Cl. botulinum типа Е), а другую при 80 "С в
течение 20 мин. Остальные пробирки оставляют непрогретыми.
При подозрении на Cl. botulinum для выявления типа Едве пробирки — одну иепрогретую и одну
прогретую при 60 *С выдерживают при температуре 28 "С. Другие две пробирки (иепрогретую и
прогретую при 80 *С) инкубируют при температуре 37 *С на другие анаэробные бактерии.
Термостатнрованне проводят в течение 5—10суток; наблюдение за ростом производят ежедневно.
При обнаружении роста производят микроскопическое исследование.
Морфология и характер роста на среде Китг-Таронни отдельных патогенных анаэробных бакте
рий приведены втабл. 5.
Выделение чистой культуры производится по следующей методике (метод рассева по Вейоиу—
Внньялю).
На мартеновском бульоне готовят полужидкий агар (0,5 %) с 0.5 % глюкозы и разливают в
пробирки по 9 см*; агар подогревают дотемпературы 55 *С и производят посев в убывающем порядке: в
первую пробирку засевают 1см’ культуры из бульона Китт-Тарошш. во вторую — 1см* из первой
пробирки, в лретью —I см’ из второй и так до пятой пробирки.