ГОСТ 33638—2015
3 Общие положения
3.1 VTG в норме продукцируется печенью яйцекладущих позвоночных самок в ответ на эндоген
ный эстроген в крови [5]. Продукт является предшественником белков яичного желтка и после синтеза
в печени транспортируется с кровотоком в яичники, где он захватывается и модифицируется под дей
ствием развивающихся яиц. Синтез VTG происходит на очень низком уровне, хотя детектируется у не
половозрелых рыб и взрослых самцов рыб. поскольку они не имеют достаточного уровня эстрогена в
крови. Однако печень способна синтезировать и секретировать VTG в ответ на стимуляцию экзогенным
эстрогеном [6]-{8].
3.2 Измерение VTG служит для обнаружения химических веществ с эстрогенным, антиэстроге-
ным, андрогенным механизмом действия и химических веществ, нарушающих стероидогенез, напри
мер. ингибиторов ароматазы. Обнаружение химических веществ с эстрогенным действием можно про
водить по измерению индукции VTG у самцов рыбы, и в специальной научной литературе имеется
большое количество сообщений по этому вопросу. Индукция VTG была также продемонстрирована по
сле воздействия ароматизированных андрогенов [9]. [10]. Снижение уровня циркулирующих эстрогенов
у самок, например в результате ингибирования ароматазы, катализирующей превращение эндогенного
андрогена в природный эстроген 17р-эстрадиол. приводит к снижению концентрации VTG, что
исполь зуется для обнаружения химических веществ, обладающих ингибирующими свойствами в
отношении ароматазы. или ингибиторов стероидогенеза в более широком смысле [11]. Установлено
и имеется много сообщений о биологическом значении изменения уровня VTG после ингибирования
эстрогенов/ ароматазы [12], [13]. Однако, возможно, что на синтез VTG у самок также могут
оказывать влияние химические вещества, обладающие общей токсичностью и эффектами, не
связанными с эндокринной системой.
3.3 Было успешно разработано и стандартизировано для широкого применения несколько мето
дов количественной оценки VTG в пробах крови, печени, всем теле или гомогенате головного’хвостово-
го концов, отобранных от отдельных рыб. Это относится к данио-рерио. трехиглой колюшке и японской
оризии. а также частично валидированному виду толстоголова; имеются методы видоспецифического
иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA), в которых используется иммунохимия для коли
чественной оценки VTG [8]. [14]—[20]. У японской оризии иданио-рерио существует высокая корреляция
между измеренными уровнями VTG в плазме крови, печени и гомогенатах, хотя анализ гомогенатов
показывает несколько более низкие значения, чем анализ проб плазмы [21]-{23]. В приложение Г при
ведены методики отбора проб для анализа VTG.
3.4 Изменение фенотипического соотношения полов (пропорции полов) является конечной точ
кой, отражающей смену пола. В принципе, эстрогены, антиэстрогены, андрогены, антиандрогены и
химические вещества, ингибирующие стероидогенез. могут влиять на соотношение полов у
развива ющихся рыб [24]. Было показано, что эта смена пола является частично обратимой у
данио-рерио [25] после воздействия химических веществ с эстрогеноподобным действием, тогда как
смена пола по сле воздействия химических веществ с андрогеноподобным действием является
постоянной [26]. Пол определяется как самка, самец, гермафродит (ооциты и сперматогенные клетки
в одной гонаде) или недифференцированные, которые устанавливаются гистологическим
исследованием половых желез у отдельных рыб. Руководящие указания приведены в приложении Е и
[27].
3.5 Генетический пол определяется с помощью генетических маркеров, когда они имеются у дан
ного вида рыб. У самки или самца японской оризии соответственно гены XX и XY могут быть обнару
жены с помощью полимеразной цепной реакции (PCR). или Y-сцелленный DM-домен гена (DMY)
может быть определен (DMY отрицательный или положительный), как описано в [28]. [29]. Для
трехиглой ко люшки существует аналогичный метод PCR для определения генетического пола,
описанный в прило жении К. Если генетический пол может быть индивидуально связан с
фенотипическим полом, то мощ ность испытания повышается, и поэтому генетический пол следует
определять у видов с уставленными генетическими половыми маркерами.
3.6 В совокупности две основные эндокринные конечные точки, VTG и соотношение полов, мо
гут свидетельствовать об эндокринном механизме действия (МОА) химического вещества (см. та
блица 1). Соотношение полов является важным биомаркером на уровне популяции [30]. [31] и для
некоторых четко определенным механизмом действия, результаты FSDT могут быть использованы
для оценки опасности и рисков, если это будет сочтено целесообразным регулирующим
органом. В настоящее время такими механизмами действия обладают ингибиторы эстрогенов,
андрогенов и стероидогенеза.
2