ГОСТ 33638-2015; Страница 23

или поделиться

Ещё ГОСТы из 41757, используйте поиск в верху страницы

ГОСТ 1.0-2015 Межгосударственная система стандартизации. Основные положения (Настоящий стандарт устанавливает цели и принципы межгосударственной стандартизации, основные направления работ и объекты межгосударственной стандартизации, организационные основы межгосударственной системы стандартизации, категории документов по межгосударственной стандартизации и правила их применения) ГОСТ 33639-2015 Методы испытаний химической продукции, представляющей опасность для окружающей среды. Испытание по оценке эмбриональной токсичности на навозных двукрылых мухах (Настоящий стандарт устанавливает метод оценки влияния испытуемого химического вещества на развитие стадий навозных двукрылых мух, заселяющих навоз. В данном стандарте насекомые подвергаются воздействию в контролируемых условиях [15] обогащенного химическим веществом навоза. Расширенное испытание, в котором мухи подвергаются воздействию навоза скота, обработанного испытуемым веществом, описано в приложении В) ГОСТ Р 56810-2015 Композиты полимерные. Метод испытания на изгиб плоских образцов (Настоящий стандарт распространяется на неармированные и армированные материалы, в том числе на слоистые полимерные композитные материалы (ПКМ), армированные непрерывными волокнами)

Страница 23

Страница 1

Untitled document

ГОСТ 33638—2015

Приложение Д

(рекомендуемое)

Руководство для количественного определения вителлогенина в гомогенате головного

и хвостового концов у данио-рерио

1 Микропланшеты (микротитрационные планшеты) (сертифицированные Maxisorp F96, Nunc, Roskilde Да

ния). предварительно покрытые 5 мкг/мл анти-липовителлин-1дС-антителами данио-рерио. размораживают и про

мывают три раза буфером для промывания*.

2 Готовят серийные разведения стандарта Battelle данио-рерио АР4.6.04 (1.18 мг/мл (ААА)) до 0.2; 0.5; 1; 2;

5; 10 и 20 нг/мл в буфере для разведения” , а пробы разводят по меньшей мере в 200 раз (для предотвращения

влияния матрицы) в буфере для разведения и вносят в лунки планшетов.

абораторный контроль применяют в

двух повторностях. 150 мкл применяют в каждой ячейке. Стандарты используют в двух повторностях и пробы —

в трех повторностях. Инкубируют в течение ночи при температуре 4 *С на шейкере.

3 Планшеты промывают пять раз буфером для промывания.

4 HRP. коньюгироеанную с декстраном (например, AMDEX.’S, Дания) и конъюгированные антитела разводят

буферомдля промывания” *; фактическое разведение отличается в зависимости от партии и возраста. 150 мкл вно

сят в каждую лунку, и планшеты инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере.

5 Планшеты промывают пять раз буфером для промывания, и дно планшета тщательно очищают этанолом.

6 150 мкл ТМБ плюс"" вносят в каждую лунку. Планшет покрывают от света фольгой и наблюдают за разви

тием цвета на шейкере.

7 Если активность фермента полностью соответствует стандартной кривой, то реакцию останавливают до

бавлением 150 мкл 0,2М H^SO,, в каждую лунку.

8 Поглощение измеряют при 450 нм (например, на ридере для планшетов Molecular Devices Thermomax).

Данные анализируют с помощью соответствующего программного обеспечения (например, SOFTmax).

Буфер для промывания;

PBS-стоковый ***’ 500.0 мл

BSA5.0 г

Твин20 5.0мл

pH доводят до 7.3, идоводят Н20 Millipore до 5 л. Хранят при температуре 4

°С.

Буфер для разведения;

PBS-стоковый ■**’ 100.0 мл

BSA3.0 г

Твин20 1.0 мл

pH доводят до 7.3, идоводят Н20 Millipore до 5 л. Хранят при температуре 4 ®С.

ТМБ плюс является «готовым к использованию» субстратом производства KemEnTec (Дания). Он чувстви

телен к воздействию света. Хранят при температуре 4 °С.

PBS-стоковый;

NaCI160.0 г

КН2Р044.0 г

Na2HP04. 2Н2026.6 г

KCI4.0 г

pH доводят до 6.8. идоводят Н20 Millipore до 2 л. Хранят при комнатной температуре.