ГОСТ 33638—2015
Введение
Настоящий стандарт разработан на основании решения, принятого в 1998 г. о необходимости раз
работки нового или обновлению существующего Руководства по испытанию для скрининга и испытания
потенциальных веществ, оказывающих отрицательное влияние на эндокринную систему. Метод испы
тания воздействия на половозрелость рыб (FSDT) был определен в качестве перспективного метода,
охватывающего чувствительную стадию цикла развития рыб. реагирующую на химические вещества с
эстроген- и андрогенподобным действием. Метод испытания проходил межлабораторную проверку до
стоверности применения с 2006 по 2010 гг., в которой были валидироваиы в качестве объектов воздей
ствия японская оризия (Oryzias latipes), данио-рерио (Damo rerio) и трехиглая колюшка (Gastcrosteus
aculeatus) и частично валидирован черный толстоголов (Pimephalespromelas) [1}-[3]. Данный протокол
основан на использовании японской ориэии. трехиглой колюшки и данио-рерио. По существу, протокол
является расширением [4], в котором воздействие продолжается до наступления половозрелости у
рыб. т. е. около 60 сут после вылупления (dph) для японской оризии. трехиглой колюшки иданио-рерио
(период воздействия может быть короче или длиннее для других видов, которые будут валидироваться в
дальнейшем), и добавляются конечные точки, чувствительные к воздействию эндокринной системы. С
использованием FSDT оценивается влияние химических веществ на ранней стадии цикла развития рыб
с предполагаемым отрицательным воздействием на эндокринную систему (например, ингибиторов
эстрогенеза. андрогенеза и стероидогенеза). а именно на половозрелость. Испытание включает соче
тание двух основных эндокринных конечных точек: концентрацию вителлогенина (VTG) и фенотипиче
ское соотношение полов, позволяющих объяснить механизм действия испытуемого химического веще
ства. FSDT могут использоваться для оценки опасности и риска за счет изменения фенотипического
соотношения полов в релевантной популяции. Однако если метод применяется для оценки опасности
или риска, то не следует использовать колюшек, поскольку имеющиеся данные по валидации показы
вают, что у данного вида рыб редко наблюдаются изменения фенотипического соотношения полов в
результате воздействия испытуемых веществ.
Протокол основан на рыбе, подвергнутой воздействию химических веществ через воду во вре
мя периода полового созревания, в котором, как ожидается, рыбы проявляют наиболее высокую чув
ствительность к влиянию химических веществ, оказывающих отрицательное влияние на эндокринную
систему и препятствующих половому развитию. В качестве показателей связанных с эндокринной
си стемой нарушений развития измеряются две основные конечные точки: концентрация VTG и
соотно шение полов, что определяется исследованием гистологии половых желез. Гистопатология
половых желез (оценка и определение стадий развития ооцитов и сперматозоидов) не является
обязательной. Кроме того, где это возможно, определяется генетический пол (например, на японской
оризии и трех иглой колюшке). Наличие маркера генетического пола дает существенное преимущество,
поскольку это повышает мощность статистики соотношения полов и позволяет определить
индивидуальную смену фенотипического пола. Другие основные конечные точки, которые следует
измерять, включают ско рость вылупления. выживание, длину и массу тела. Метод испытания может
быть адаптирован к другим видам рыб. помимо упомянутых выше, при условии проведения
процедуры валидации, аналогичной проделанной для японской оризии. трехиглой колюшки и данио-
рерио. где контрольные рыбы в конце испытания проходят половое дифференцирование, уровни VTG
были достаточно высокими для выяв ления значительных изменений, связанных с химическим
веществом, и чувствительность тест-системы устанавливалась с помощью стандартных активных для
эндокринной системы химических веществ, таких как антиэстрогены, антиандрогены, ингибиторы
ароматазы и т. д. Кроме того, отчет(ы) по валида ции со ссылкой на данные FSDT с использованием
других видов рыб должен(ны) быть рассмотрен(ы) ОЭСР, а итоги валидации должны рассматриваться
в качестве удовлетворительных.
VI