ГОСТ 33638—2015
3 Выбирают форму для заливки соответствующего размера.
4 Форму держат перед носиком дозирующей консоли и заполняют расплавленным парафином.
5 Образец извлекают из кассеты и помещают в расплавленный парафин в форме. Такую процедуру повто
ряют с 4-8 образцами для каждой формы для заливки парафином. Положение каждой рыбы отмечают расположе
нием рыбы № 1на 180’ по отношению к рыбам 2 — 4/а.
6 Добавляют дополнительное количество парафина для покрытия образца.
7 Форму с кассетами помещают на охлаждающую пластину криоконсоли.
8 После затвердевания парафина блок (т. е. затвердевший парафин, содержащий ткани и кассеты) извле
кают из формы.
Приготовление гистологических срезов
Цель:
Сделать и приготовить гистологические срезы для окрашивания
Процедуры:
1 Начальную фазу микротомии называют «облицовкой» и проводят следующим образом:
а) парафиновый блок устанавливают в патрон микротома;
б) патрон продвигают вращением колеса микротома, и толстые срезы вырезают с парафиновой поверхности
блока до тех пор, нож не достигнет залитых тканей;
в) толщину среза на микротоме устанавливают между 3-5 мкм. Патрон продвигают и делают многочисленные
срезы с блокадля удаления любых артефактов, появившихся на поверхности среза ткани во время грубой обрезки;
г) блок удаляют из патрона и помещают лицевой стороной на лед для замачивания тканей.
2 Следующим этапом микротомии является окончательное приготовление срезов и помещение срезов ткани
на предметные стекла. Данные процедуры проводят следующим образом:
а) если блок был помещен на лед. то блок удаляют со льда и помещают в патрон микротома;
б) устанавливают толщину срезов на микротоме в 3-5 мкм. патрон продвигают вращением колеса микрото
ма. срезы срезают с блока, пока не получена «лента», содержащая не менее одного приемлемого среза, включа
ющего гонады. (При необходимости в процессе приготовления срезов блок удаляют из патрона, помещают на лед
для замачивания тканей и заменяют в патроне);
в) срезы помещают на плоскую поверхность воды в водяной бане. Предпринимают попытку получить хотя
бы. один срез, не содержащий неровностей и пузырьков воздуха под ним;
г) на предметное стекло микроскопа помещают наилучший срез, который поднимают из воды, используя
стекло. Этот процесс называется «фиксацией» среза на стекле;
д) готовят три среза для ряда рыб. Второй и третий срезы отбирют с интервалом в 50 мкм от первого
среза. Если рыбы не залиты с их гонадами на том же самом уровне приготовления срезов, то следует при
готовить еще несколько срезов для получения не менее шести срезов, включающих гонады, полученные из
каждой рыбы;
е) маркером, для стекол наносят номер блока, из которого было получено стекло;
ж) стекло помещают в подставку для окрашивания;
и) блок удаляют из патрона и помещают лицевой стороной вниз на хранение.
Окрашивание, покрытие покровным стеклом и маркировка стекол
Цели:
1 Срезы окрашивают для гистологического исследования.
2 Герметично закрывают подготовленные и окрашенные ткани.
3 Идентифицируют окрашенные срезы способом, обеспечивающим полную прослеживаемость образцов, на
длительный период времени.
Процедуры:
1 Окрашивание:
а) стекла высушивают на воздухе перед окрашиванием:
б) срезы окрашивают гематоксилин-эозином.
2 Покрытие покровным стеклом:
а) покровные стекла можно наносить вручную или автоматически;
б) стекло погружают в ксилол или TissueClear. и избыток ксилола/ TissueClear осторожно удаляют со стекла;
в) приблизительно 0.1 мл фиксирующей среды наносят ближе к концу стекла, противоположному заморожен
ному концу или на покровное стекло;
г) покровное стекло наклоняют под небольшим утлом при нанесении на предметное стекло.
3 Маркировка;
а) маркировка каждого стекла должна содержать следующую информацию:
- наименование лаборатории;
- виды;
- образец № /Стекло N«:
- химическое вещество / обработанная группа;
- дата.
19