ГОСТ ISO 14160—2011
мами. использованными при первичной аттестации эксплуатируемого оборудования и валидации. Необходимо
оценить относительную резистентность контрольных микробиологических изолятов с точки зрения процесса сте
рилизации.
Один из подходов к первичному контрольному испытанию на резистентность заключается в том. чтобы под
вергнутьвоздействию жидкогохимическогостерилизующего средства при минимальных параметрахпроцесса сте
рилизации суспензию, содержащую не менее 105 выделенных микроорганизмов, и выдержать ее там в течение
времени, равного величине D самого резистентного микроорганизма, используемого при аттестации эксплуатируе
мого оборудования. Если после такой выдержки обнаруживаютсяжизнеспособные микроорганизмы, то это означа
ет, что резистентность изолята на 20 % или более превышает резистентность самого устойчивого микроорганизма,
применяемого при аттестации эксплуатируемого оборудования. В этом случае полученный изолят подлежит
полной идентификации, а кинематика его инактивации — детальному изучению.
А.4.2.4 Исследование кинетики микробиологической инактивации £5.3.6]
А.4.2.4.1 Общие положения
При проведении аттестации эксплуатируемогооборудования строят кривую инактивации для каждого микро
организма. причем кривая должна строиться как минимум по пяти точкам, охватывающим, по крайней мере, тыся
чекратное снижение числа микроорганизмов. Каждая точка обычно строится по трем повторным опытам и должна
иметь воспроизводимость в пределах удвоенного стандартного отклонения.
По полученным результатам может быть рассчитана величина О наиболее резистентного микроорганизма,
используемого вопытах. Расчет величины Овозможен при условии, что вполулогарифмических координатах (лога
рифм числа выживших микроорганизмов в зависимости от времени выдержки) кривая выживания является линей
ной. Если имеются отклонения от линейности, то предсказать параметры удовлетворительного процесса
стерилизации трудно. Такие отклонения должны служить предметом дальнейшего изучения в целью лучшей харак
теристики кинетики инактивации.
Чтобы оценить величину D при малых количествах выживших микроорганизмов, можно использовать метод
наиболее вероятного числа (НВЧ), проводимый с тремя наиболее резистентными квоздействию данного процесса
стерилизации микроорганизмами. Полученная величина D может быть использована в качестве критерия приемле
мости расчетного времени выдержки.
Определение величины О методом НВЧ описано в приложении В х ISO 11135.
А.4.2.4.2 Этапы исследований
Валидацию процессов стерилизации жидкими химическимисредствами следует проводить так, чтобы можно
было оценить взаимное влияние друг на друга тест-микрорганизмов и медицинского изделия. Это достигается при
определении кинетики инактивации тест-микроорганизмов, культивируемых совместно с медицинским
изделием или инокулированных на нем.
Такая оценка включает четыре этапа исследований:
- определение компонентов, которые представляют наибольшее сопротивление воздействию жидкого
химического стерилизующего средства;
- определение метода, с помощью которого микроорганизмы обнаруживаются на медицинском изделии или
на выбранном компоненте:
- валидацию метода восстановления/определения микроорганизмов на медицинском изделии или выбран
ном компоненте:
- определение кинетики инактивации тест-микроорганизмов в присутствии медицинского изделия или
выбранного компонента.
Используютметод прямогоподсчета числа выживших микроорганизмов взависимости от времени обработки
(криваявыживания).методНВЧ(например.егоразновидностиметодСтамбо-Мэрфи-Кокран
(Stumbo-Murphy-Cochran) или метод Спирмен-Карбер (Spearman-Karber)) (9]. Построение кривой выживания пред-
подчтительней. так как этот метод предоставляет достаточные данные для описания кинетики инактивации
тест-микроорганизмов в присутствии медицинского изделия или выбранного компонента.
Метод НВЧ может применяться, если медицинское изделие или компонент не позволяют проводить последо
вательное выявление выжившей популяции микроорганизмов в зависимости от времени обработки (т.е. медицин
ское изделие или носитель не могут подвергаться вымачиваниюдля взятия пробы с целью определения популяции
выживших микроорганизмов).
Хотя прямой подсчет и построение кривой выживания дают больше информации о кинетике инактивации
тест-микроорганизма, они в то же время могут потребовать больше времени и ресурсов. Процедуры прямого под
счета связаны с извлечением всех жизнеспособных микроорганизмов после определенного времени выдержки в
жидком химическом стерилизующем средстве. Извлечение может проводиться также, как при оценке бионагрузки
(ISO 11737-1), например, путем гомогенизации испытуемого компонента и приготовления соответствующих раз-
ведений для подсчета выживших микроорганизмов.
Гомогенизация испытуемого компонента (например, животных тканей) может быть проведена путем его
асептического вымачивания или диспергирования/растворения в стерильном разбавителе. Готовятся последова
тельные разведения суспензии, и на соответствующих разведениях производится прямой подсчет по стандар
тным методам (ISO 11737-1).
12