30
ДВ.2.5 Установление градуировочной характеристики
Колбы с подготовленными по ДВ.2.4 градуировочными растворами закрывают ватно-марлевыми проб-
ками, встряхивают, помещают в люмностат или климатостат и выдерживают 15 мин при температуре
(20 ± 2) °С и освещенности 3000 — 6000 лк (для метода А) или (23 ± 2) °С и освещенности 6000 —10000 лк (для
метода Б), после чего содержимое каждой колбы (включая холостую пробу) тщательно перемешивают.
Затем, используя счетную камеру Горяева, под микроскопом подсчитывают (см. ДВ.1) в каждой колбе не
менее чем в двух повторностях плотность (численность) клеток водорослей и рассчитывают их средне-
арифметическое значение x
i
. После этого, в соответствии с инструкцией (руководством) по эксплуатации
прибора, в каждой соответствующей колбе измеряют не менее трех раз значения интенсивности флуорес-
ценции B
i
и подсчитывают среднеарифметическое значение.
П р и м е ч а н и е — Измерения флуоресценции необходимо проводить сразу после подсчета клеток
каждого заданного разведения (концентрации) в камере Горяева.
По полученным значениям x
i
и B
i
строят градуировочный график в виде функциональной зависимости B
i
от x
i
, используя компьютерную систему сбора и обработки данных.
При отсутствии компьютерных систем сбора и обработки данных функциональную зависимость В
i
от Х
i
устанавливают по угловому коэффициенту (наклону) b (отн. ед)
·
см
3
/клеток, рассчитываемому по
формуле
i
i
i
=
=
å
X
i
D
B
b
=
i
1
,
å
(X
i
)
2
i 1
(ДВ.2)
где Х
i
— плотность (численность) клеток водорослей в i-м градуировочном растворе, клетки/см
3
;
D
В
i
— разница между значениями В
i
интенсивности флуоресценции i-го градуировочного раствора за
вычетом среднеарифметического значения интенсивности флуоресценции холостой пробы;
i — число использованных градуировочных растворов (см. ДВ.2.4).
П р и м е ч а н и е — Градуировочный график должен иметь линейную зависимость, в противном случае
следует установить причину, заново приготовить градуировочные растворы и повторить градуировку.
ДВ.2.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики
Периодически, но не реже двух раз в год, проводят контроль градуировочной характеристики с исполь-
зованием градуировочных растворов по ДВ.2.4.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если сохраняются угол наклона градуировоч-
ного графика и линейная зависимость интенсивности флуоресценции от плотности (численности) клеток
градуировочных растворов.
ДВ.2.7 Проведениеизмерений
ДВ.2.7.1 Определение плотности (численности) клеток водорослей после культивирования
Колбу с подготовленными по приложению ДБ водорослями (для метода А — по ДБ.1.3; для метода Б — по
ДБ.2.3), закрывают ватно-марлевой пробкой, встряхивают вручную, выдерживают 30 мин при температуре:
(20 ± 2) °С (для метода А) или (23 ± 2) °С (для метода Б) и освещенности: 3000—4000 лк (для метода А) или
6000—7000 лк (для метода Б), затем снова перемешивают и из колбы автоматической пипеткой переносят в
кварцевую кювету прибора аликвоту суспензии водорослей, равную объему кварцевой кюветы, кювету с
аликвотой суспензии водорослей помещают в камеру прибора для измерения интенсивности флуоресцен-
ции суспензии водорослей.
Порядок проведения измерений — по ДВ.2.7.4.
Определение значений плотности (численности) клеток водорослей — по ДВ.2.8.
ДВ.2.7.2 Определение начальной плотности (численности) клеток водорослей перед тестированием
Конические колбы с пробами, подготовленными по 5.4.3.1 и 5.4.3.2, а также с пробами, подготовленны-
ми по ДВ.2.1, закрывают ватно-марлевыми пробками, встряхивают вручную, после чего помещают в клима-
тостат и выдерживают 15 мин при температуре: (20 ± 2) °С (для метода А) или (23 ± 2) °С (для метода Б) и
освещенности: 3000—4000 лк (для метода А) или 6000—7000 лк (для метода Б).
После выдерживания колб в климатостате, каждую колбу (включая колбы с холостой и контрольной
пробами) встряхивают вручную. Затем из конкретной колбы отбирают автоматической пипеткой аликво-ту
пробы, равную объему кварцевой кюветы прибора, кювету с аликвотой пробы помещают в камеру прибо-ра
для измерения интенсивности флуоресценции клеток водорослей.
Порядок проведения измерений — по ДВ.2.7.4.
Определение значений плотности (численности) клеток водорослей — по ДВ.2.8.
ГОСТР 54496—2011