29
водорослей Х в 1 см
3
суспензии водорослей рассчитывают по
Плотность (численность) клеток
формуле
X = m
·
10
4
,
(ДВ.1)
где m — суммарное количество клеток водорослей в учтенных больших квадратах сетки;
10
4
— коэффициент пересчета кубических миллиметров в кубические сантиметры.
Плотность (численность) клеток водорослей подсчитывают в каждой колбе, отбирая по две
аликвоты.
За результат подсчета плотности (численности) клеток водорослей принимают среднеарифмети-
ческое значение не менее двух определений для каждой заданной кратности разбавления (концентрации)
анализируемой пробы, в том числе и контрольной пробы, если абсолютная величина разности между ними не
превышает 5 % от среднего значения.
ДВ.2 Определение плотности (численности) клеток водорослей с использованием метода
флуориметрии
ДВ.2.1 Приготовлениепроб
ДВ.2.1.1 Приготовление холостой пробы
Холостую пробу готовят следующим образом: в конические колбы вместимостью 250 см
3
вносят
100 см
3
питательной среды, приготовленной в соответствии с требованиями приложения ДА (для
метода А — питательная среда Прата по ДА.1.2; для метода Б — питательная среда по ДА.2.2).
ДВ.2.1.2 Приготовление пробы контроля фона — по 5.3.3.
Для каждой анализируемой пробы подготавливают пробу контроля фона, представляющую собой кон-
центрацию анализируемого вещества (кратности разбавления) по 5.3.2.6, но без добавления водорослей.
П р и м е ч а н и е — При тестировании окрашенных или мутных проб может возникнуть мешающее
влияние, обусловленное ослаблением светового потока, необходимого для роста клеток водорослей в ана-
лизируемой пробе. В таком случае измеряют интенсивность флуоресценции пробы без водорослей (фоно-
вые растворы) и полученное значение вычитают из значения интенсивности флуоресценции, полученного
при измерении пробы с водорослями.
ДВ 2.1.3 Приготовление контрольной пробы
Приготовление контрольной пробы проводят
- для метода А — по 5.4.3.2;
- для метода Б — аналогично 5.4.3.2, но с использованиемпитательнойсреды по ДА.2.2
(приложение ДА).
ДВ.2.2 Подготовка прибора к измерениям
Прибор готовят к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации.
Устанавливают следующие параметры работы прибора:
- температура 20 °С (при наличии термостатирования);
- область длин волн для возбуждения флуоресценции 400—500 нм; область длин волн для регистрации
интенсивности флуоресценции 650—750 нм.
ДВ.2.3 Градуировкаприбора
Градуировку прибора выполняют с использованием средств программного обеспечения прибора (или с
использованием компьютерных систем обработки данных) с применением градуировочных растворов по
ДВ.2.4. При этом коэффициент линейной корреляции полученных градуировочных характеристик должен
быть не менее 0,99.
ДВ.2.4 Приготовлениеградуировочныхрастворов
Градуировочные растворы готовят следующим образом: подготовленную культуру водорослей
(см. приложение ДБ) вносят в колбы вместимостью 250 см
3
и разбавляют питательной средой, приготов-
ленной в соответствии с требованиями приложения ДА (для метода А — среда Прата по ДА 1.2, для метода
Б — питательная среда по ДА.2.2) в соотношении:
- 50 см
3
суспензии водорослей и 50 см
3
питательной среды (разбавление в два раза);
- 25 см
3
суспензии водорослей и 75 см
3
питательной среды (разбавление в четыре раза);
- 16,6 см
3
суспензии водорослей и 83,4 см
3
питательной среды (разбавление в шесть раз);
- 12,5 см
3
суспензии водорослей и 87,5 см
3
питательной среды (разбавление в восемь раз);
- 10 см
3
суспензии водорослей и 90 см
3
питательной среды (разбавление в 10 раз);
- 5 см
3
суспензии водорослей и 95 см
3
питательной среды (разбавление в 20 раз);
- 2,5 см
3
суспензии водорослей и 97,5 см
3
питательной среды (разбавление в 40 раз);
- 1,66 см
3
суспензии водорослей и 98,34 см
3
питательной среды (разбавление в 60 раз); -
1,25 см
3
суспензии водорослей и 98,75 см
3
питательной среды (разбавление в 80 раз); -
1,0 см
3
суспензии водорослей и 99 см
3
питательной среды (разбавление в 100 раз);
- 0,1 см
3
суспензии водорослей и 99,9 см
3
питательной среды (разбавление в 1000 раз).
ГОСТР 54496—2011