11
3
5.3.5 Проверкафизиологическойчувствительноститест-организмов
Периодически (не реже одного раза в месяц), а также непосредственно перед тестированием,
культуруводорослейвэкспоненциальнойфазеростапроверяютнафизиологическуючувствительность.
Для этого определяют эффективную концентрацию (48 чЭК
50
) модельного токсиканта (см. 5.2)
вследующейпоследовательности:
5.3.5.1 Готовятисходныйраствормодельноготоксикантамассовойконцентрацией 1 г/дм
3
сле-
дующимспособом: в мерную колбувместимостью 1000 см
3
вносят 1 гдвухромовокислогокалия ира-
створяютвнебольшомколичестведистиллированнойводы (см. 5.2), затемдоводятсодержимоекол-
быдометкидистиллированнойводой, тщательноперемешивают.
Срокхраненияисходногорастворамодельноготоксиканта — неболее 7 сут.
5.3.5.2 Готовят анализируемые растворы модельного токсиканта (калиядвухромовокислого)
заданнойконцентрациивследующейпоследовательности:
- приготавливают растворы двухромовокислого калия с массовой концентрацией от 0,1 до
2,5 мг/дм
3
следующимспособом: всемьмерныхколбвместимостью 200 см
3
вносятнебольшоеколиче-
ство питательной среды Прата [см. ДА.1.2 (приложение ДА)], затем добавляют исходный раствор
двухромовокислогокалиямассовойконцентрацией 1 г/дм
3
(см. 5.3.5.1), соответственно, впервуюкол-
бу — 0,02 см
3
, во вторую колбу — 0,05 см
3
, в третью колбу — 0,1 см
3
, в четвертую колбу — 0,2 см
3
,
впятуюколбу — 0,3 см
3
,вшестую — 0,4 см
3
, вседьмую — 0,5 см
3
, доводятсодержимоекаждойколбы
до метки питательной средой и перемешивают. При этом в каждой колбе массовая концентрация
приготовленногорастворамодельноготоксиканта (двухромовокислогокалия) составляетсоответ-
ственно: 0,1; 0,25; 0,5; 1,0; 1,5, 2,0 и 2,5 мг/дм
3
;
- затемдлякаждойприготовленнойконцентрациимодельноготоксиканта (двухромовокислого
калия) готовятвтрехколбахвместимостью 100 см
3
анализируемые растворы следующим образом:
вкаждуюколбудобавляютпо 50 см
3
конкретного раствора модельного токсиканта (двухромовокис-
логокалия), после чего вносят определенный объемсуспензииводорослей, рассчитанныйнаобъем
50 см
3
.
Анализируемыерастворыдвухромовокислогокалиякаждойконцентрацииготовятнепосредственно
передопределениемфизиологическойчувствительностиводорослей.
ДляприготовленияконтрольнойпробыиспользуютсредуПрата [см. ДА.1.2 (приложениеДА)].
Плотность (численность) клетокводорослейвначалетестированиядолжнанаходитьсявпределах
2,0
·
10
4
— 2,5
·
10
4
клеток/см
3
.
5.3.5.3 Тестированиеанализируемыхрастворовзаданныхконцентрациймодельноготоксиканта
(см. 5.3.5.2) проводят, как указано в 5.4.3, в течение 48 ч.
5.3.5.4 Подсчитывают плотность (численность) клеток водорослей одним из методов, приве-
денных в приложении ДВ, и на основании полученных результатов определяют по 5.5.4 значение 48 ч
ЭК
50
модельноготоксиканта (двухромовокислогокалия), приэтом:
- если значение 48 ч ЭК
50
данного модельного токсиканта находится в диапазоне от 1,3 до
2,5 мг/дм , тосчитают, чтоподготовленныеводорослипригодныдлятестирования;
- если значение 48 ч ЭК
50
данного модельного токсиканта не входит в указанный диапазон, то
считают, что подготовленные водоросли не пригодны для тестирования. Проверяют соблюдение
правильностипроцедурытестирования, условияподготовкиводорослейктестированиюи, принеоб-
ходимости, повторяюттестированиесиспользованиемобновленнойкультурыводорослей.
ПримерприведенвприложенииДГ.
П р и м е ч а н и е – Значение 48 ч ЭК
50
раствора модельного токсиканта указывают в протоколе
испытаний, имея в виду, что это значение в установленном диапазоне концентраций характеризует
токсичность модельного токсиканта только для использованных водорослей, характеризует их физиоло-
гическую чувствительность, что позволяет (или не позволяет) проводить тестирование с данными водо-
рослями.
5.3.5.5 Еслипорезультатамтестированиянеудалосьполучитьконкретноезначение 48 чЭК
50
,
тодляопределения 48 чЭК
50
модельноготоксикантаиспользуютпробит-анализ. Аналогичныйпример
приведенвприложенииДД.
5.4 Проведение тестирования
Тестированиепроводятвдваэтапа: предварительноеиокончательное.
П р и м е ч а н и е — Тестирование проб природной и питьевой воды проводят в один этап без предва-
рительного тестирования.
ГОСТР 54496—2011