26
Приложение ДБ
(обязательное)
Методыкультивирования водорослей
ДБ.1 Культивирование водорослей для методов А и В
ДБ.1.1. Культивирование водорослей Chlorella vulgaruis Beijer и Scenedesmus quadricauda (Turp.) Breb
проводят в конических колбах вместимостью 250 см
3
на питательной среде Прата [см. ДА.1.2 (приложение
ДА)] в условиях по 5.4.3.3.
ДБ.1.2 Обновление культуры водорослей
Периодически в процессе культивирования обновляют культуру водорослей, пересевая ее на свежую
питательную среду Прата не реже одного раза в 7 сут.
Обновление культуры водорослей проводят следующим способом: в стерильную колбу вместимостью
250 см
3
со свежей питательной средой объемом 150 см
3
над пламенем спиртовки вносят 15 —20 см
3
верхнего
ростового слоя маточной культуры (содержимое маточной культуры при этом не перемешивают). Затем
колбу закрывают стерильной ватно-марлевой пробкой и бумажным колпачком, перемешивают и выдержива-
ют в условиях по 5.4.3.3 (метод А) или по 6.4.1 (метод Б). В процессе культивирования культуру водорослей в
колбе периодически перемешивают, встряхивая один—два раза в сутки.
ДБ.1.3 Подготовка водорослей к тестированию
ДБ.1.3.1 Для тестирования культуру водорослей готовят в экспоненциальной фазе роста с заданной
плотностью (численностью) клеток следующим способом: за 3 сут до начала тестирования в колбу
вместимостью 250 см
3
над пламенем спиртовки добавляют 100 см
3
питательной среды Прата, вносят, не
перемешивая, 20 см
3
верхнего ростового слоя водорослей из маточной культуры после культивирования в
течение 7 сут (плотность 4
·
10
6
— 5,0
·
10
6
клеток/см
3
). Затем колбу закрывают ватно-марлевой пробкой и
колпачком, содержимое перемешивают и выдерживают в условиях по 5.4.3.3 в течение 3 сут. При этом
культуру водорослей в колбе периодически перемешивают, встряхивая один—два раза в сутки.
ДБ.1.3.2 Через 3 сут, непосредственно перед тестированием определяют плотность (численность)
клеток водорослей в полученной культуре одним из методов, приведенных в приложении ДВ, и рассчитыва-
ют объем суспензии водорослей, необходимый для внесения в каждую колбу при тестировании.
При использовании прибора для подсчета плотности (численности) клеток водорослей полученное
значение интенсивности флуоресценции в отн. ед. умножают на коэффициент пересчета (см. 7.3.5.3) и
получают соответствующую этому значению плотность (численность) клеток [см. ДВ.2 (приложение ДВ)].
ДБ.2 КультивированиеводорослейдляметодаБ
ДБ.2.1. Культивирование водорослей Desmodesmus subspicatus Chodat или Pseudokirchneriella subcapitata
(Korshikov) Hindak проводят в конических колбах вместимостью 250 см
3
на питательной среде, приготовлен-
ной по ДА.2.2 (приложение ДА) в условиях по 6.4.1.
ДБ.2.2 Обновление культуры водорослей — по ДБ.1.2.
ДБ.2.3 Подготовка водорослей к тестированию
ДБ.2.3.1 Для тестирования культуру водорослей готовят в экспоненциальной фазе роста с достаточно
низкой плотностью (численностью) клеток водорослей (например, от 5
·
10
3
до 10
4
клеток/см
3
) следующим спосо-
бом: за 2—4 сут до начала тестирования в колбу вместимостью 250 см
3
над пламенем спиртовки вносят 100 см
3
питательной среды [см. ДА.2.2 (приложение ДА)], добавляют не перемешивая необходимое количество суспен-
зии водорослей из маточной культуры после культивирования (см. ДБ.2.1), для того чтобы получить начальную
плотность (численность) клеток водорослей примерно от 5
·
10
3
до 10
4
клеток/см
3
. Затем колбу закрывают
ватно-марлевой пробкой и колпачком, содержимое перемешивают и выдерживают в условиях по 6.4.1 в тече-
ние 3 сут.
ДБ.2.3.2 Определение плотности (численности) клеток водорослей — по ДБ.1.3.2.
ДБ.3 Адаптация культуры водорослей к минерализации от 3 до 6 г/дм
3
ДБ.3.1 Адаптацию культуры водорослей к минерализации исследуемого объекта от 3 до 6 г/дм
3
прово-
дят заранее к питательной среде с минерализацией 5 г/дм
3
и содержат ее в заданных условиях для культи-
вирования.
Питательную среду с минерализацией 5 г/дм
3
готовят наискусственнойморскойводе по
ГОСТ Р 53910.
ДБ.3.2 Адаптацию водорослей проводят в течение 20 сут, постепенно заменяя в культуре водорослей
питательную среду по ДА.1 на питательную среду с минерализацией 5 г/дм
3
.
ДБ.3.3 Через каждые 5 сут меняют соотношение адаптируемой культуры водорослей и питательной
среды с минерализацией 5 г/дм
3
в последовательности:
ДБ.3.3.1 В стерильную колбу вместимостью 250 см
3
над пламенем спиртовки вносят 80 см
3
суспензии
водорослей в экспоненциальной фазе роста (в возрасте 3 сут) и добавляют 20 см
3
питательной среды с
ГОСТР 54496—2011