20
Приэтом значение интенсивности флуоресценции клеток водорослей в начале тестирова-
ниядолжнонаходитьсявпределах 0,20—0,25, чтосоответствуетплотности (численности) клеток
2,0
·
10
4
— 2,5
·
10
4
клеток/см
3
(прикоэффициентепересчета 1
·
10
6
клеток/см
3
).
П р и м е ч а н и е — Коэффициент пересчета, принимают равным 1
·
10
6
клеток/см
3
, если значение
углового коэффициента (наклона) градуировочной характеристики составляет 0,99 [см. ДВ.2.3, ДВ.2.5
(приложение ДВ)].
7.3.6 Проверкафизиологическойчувствительноститест-объектов (тест-организмов)
Приготовлениерастворовмодельноготоксиканта (двухромовокислогокалия) — по 5.3.5.1, 5.3.5.2.
Тестированиеанализируемыхрастворовмодельноготоксикантапроводятпо 5.4.3.4 втечение
48 ч, послечегоизмеряютпоДВ.2.7.4 (приложениеДВ) интенсивностьфлуоресценциикаждогораство-
рамодельноготоксиканта. Приэтомизмеренияинтенсивностифлуоресценциикаждойаликвоты (из
каждойколбы) каждойконцентрациирастворамодельноготоксикантапроводятнеменеетрехраз.
Обработкарезультатовизмерений — по 7.5.4 сучетомтребований 5.3.5.4. Примерприведенв
приложенииДГ (см. таблицуДГ.2).
Еслипорезультатамтестированиянеудалосьполучитьконкретноезначение 48 чЭК
50
, тодля
определения 48 чЭК
50
модельноготоксикантаиспользуютпробит-анализ. Аналогичныйпримерприве-
денвприложенииДД.
7.3.7 Приготовлениехолостойпробы
Холостую пробу готовят следующим образом: в конические колбы вместимостью 250 см
3
вно-
сят 100 см
3
питательнойсредыПрата, приготовленнойвсоответствиистребованиямиДА.1.2 (при-
ложениеДА).
7.3.8 Приготовлениепробыконтроляфона — по 5.3.3.
П р и м е ч а н и е — При тестировании окрашенных или мутных проб может возникнуть мешающее
влияние, обусловленное ослаблением светового потока, необходимого для роста клеток водорослей в ана-
лизируемой пробе. В таком случае измеряют интенсивность флуоресценции пробы без водорослей (фоно-
вые растворы) и полученное значение вычитают из значения интенсивности флуоресценции, полученного
при измерении пробы с водорослями.
7.3.9 Подготовкаконтрольнойпробы
Длякаждойпробыанализируемыхразбавлений (концентраций) подготавливаютконтрольнуюпро-
бу следующим способом: в конические колбы вместимостью 250 см
3
вносят по 100 см
3
питательной
средыПрата [см. ДА.1.2 (приложениеДА)], добавляютпо 1,0 см
3
суспензииводорослейвэкспоненциаль-
нойфазероста (см. 5.3.4), перемешивают, выдерживают 30 минпритемпературеиосвещенностипо
5.4.3.4, затемсноваперемешивают, послечегоизколбыавтоматическойпипеткойпереносятвквар-
цевуюкюветуприбораобъемаликвотыконтрольнойпробы, равныйобъемукварцевойкюветы, кювету
саликвотойконтрольнойпробыпомещаютвкамеруприборадляизмеренияинтенсивностифлуорес-
ценцииводорослей.
Порядокпроведенияизмерений — поДВ.2.7.4 (приложениеДВ).
Обработкарезультатовизмеренийаналогичнапроцедуре, приведеннойв 7.3.5.2 (сучетомчисла
колб, использованныхдляприготовленияконтрольныхпробдляпредварительногоилиокончательного
тестирования).
Значениеинтенсивности флуоресценции клеток водорослейвконтрольнойпробевначалетес-
тированиядолжнонаходитьсявпределах 0,20—0,25, чтосоответствуетплотности (численности)
клеток 2,0
·
10
4
— 2,5
·
10
4
клеток/см
3
(коэффициентпересчетаравен 1
·
10
6
клеток/см
3
).
П р и м е ч а н и я
1 С целью получения в начале тестирования плотности (численности) клеток водорослей в пределах
от 2,0
·
10
4
до 2,5
·
10
4
клеток/см
3
, достаточно в каждую колбу на 100 мл питательной среды внести 1,0 см
3
суспензии водорослей из культуры, плотность (численность) которой находится в пределах от 2,0
·
10
6
до
2,5
·
10
6
клеток/см
3
, что соответствует интенсивности флуоресценции клеток водорослей в пределах
0,20—0,25.
2 При проведении тестирования контрольные пробы готовят в двух колбах — для предварительного
тестирования; в трех колбах — для окончательного тестирования.
7.4 Проведениеизмерений
Тестированиеподготовленныхпроб (см. 7.3.2, 7.3.7—7.3.9) проводятаналогичнотребованиям,
установленнымв 5.4, приэтомчерезкаждые 24 чпроводятизмерениеинтенсивностифлуоресценции
аликвотанализируемыхпроб, отобранныхизкаждойколбы, включаяконтрольные, холостыепробыи,
еслииспользовалисьпробыконтроляфона, какуказановДВ.2.7.4 (приложениеДВ).
ГОСТР 54496—2011