ГОСТ Р ИСО 11737-1-2000
А.5.2.1.2 Метод инокуляиии продукта
Для определения эффективности выделения может создаваться искусственная бнонагрузка продукта
инокуляцией известного Количества выбранных микроорганизмов. Микроорганизмы могут быть вегетативными
клетками или спорами; обычно используют аэробные бактериальные споры. Применение вегетативных
микроорганизмов на практике затруднено из-за потери их жизнеспособности при высушивании.
Микроорганизмы, используемые для валилапионных исследований, выбирают, исходя из естественной
бионагрузки. Выбранные микроорганизмы могут включать представителей:
a) плесеней;
b
) мезофильных вегетативных микроорганизмов (трам-положительных н/или грам-отрнцатсльных);
c) спор спорообразуюших грам-положительных бактерий.
Использование анаэробных спорообразуюших бактерий для налидаиионных исследований может пред
ставлять большие практические трудности.
Жизнеспособные частицы должны быть установлены но время инокуляции. После высушивания иноку
лята. сети это допустимо для конкретного продукта, используется выбранный для него метод выделения
микроорганизмов. Отношение полученного титра ктитру исходного инокулята даст эффективность регенерации
для конкретного метода и продукта.
Микробная инокуляция имеет такие ограничения, как инкрустация, адгезия суспензии, группировка
клеток в конгломераты и колебания уровня инокулята, и эти ограничения должны приниматься в расчет при
инокуляиии продукта.
Инокуляции продуктов из абсорбирующих материалов можег совершаться погружением в суспензию
выбранных микроорганизмов. Эта процедура может приводить к равномерному распределению микроорганиз
мов на продукте.
А.5.2.2 Элюент
Элюент нс должен способствовать росту или ингибировать реют микроорганизмов, удаляемых с продукта.
Чтобы установить такой эффект эдикта, небольшое известное количество микроорганизмов должно быть
инокулировано в продукт и оставлено вэлюсите на время, представляющее худшие условия работы с ним. Тогда
метод оценки бионагрузки может быть использован с учетом эффектов ингибирования или способствования
росту.
А.5.2.3 Физические методы удаления
Для удаления микроорганизмов из продукта могут быть использованы физические воздействия (А.4.2.4).
Должна быть устано&чсна эффективность этого воздействия на оценку бионагрузки с использованием неболь
шого количества микроорганизмов (около 100 КОЕ). Эффективность определяется путем подсчета микроор
ганизмов. При этом должны приниматься во внимание возможные эффекты воздействия элюента на
выживаемость удаляемых из продукта микроорганизмов (А.5.2.2).
А.5.3 Валидации методов подсчета
А.5.3.1 При валидации методов подсчета нужно учитывать:
a) вид введенных микроорганизмов;
b
) числоожидаемых микроорганизмов-когггаминантов. Для этою может потребоваться концентрирование
или разведение элюента;
c) возможность использования метаболической активности для оценки числа микроорганизмов.
А.5.3.2 Валилааия оценки бионагрузки зависит главным образом от следующих факторов:
a) способности выбранных питательных сред поддерживать ныяатенные микроорганизмы . составляющие
бионагрузку:
b
) соотношения выбранной температуры и времени инокуляиии поддерживающих рост микроорганизмов
в выбранной питательной среде.
А.6 Использование методов опенки
А.6.1 Общие положения
При использовании оценки бионагрузки для определения режима стерилизации важное значение имеет
точность лой оценки. При текущем контроле процесса производства нужно пользоваться точным методом
оценки бионагрузки, чтобы установить изменения до того, как будет достигнут уровень, при котором
стерилизация окажется неэффективной.
Для подтверждения адекватности установленного процесса стерилизации на практике необходимо иметь
общее представление о бионагрузке, причем оценка ее должна быть аккуратной и точной.
Оценка бионагрузки во время начальной валидации дает основу для обнаружения изменений в процессе
эксплуатации. Эта оценка может служить для определения непредвиденных изменений или атияния изменении на
производственный процесс или производственную среду. Установление контролируемых пределов процесса и
анализ тенденций позволяют своевременно определить изменения бионагрузкн.
А.6.2 Пределы контроля
Выбор пределов оценки бионагрузки при контроле основывается на ретроспективной анализе. Данные
могут анализироваться на соответствие известному математическому распределению (например, нормальному,
13