ГОСТ Р ИСО 11737-1-2000
А.4.2.6.3 Заливаемые пластины (метод разливок)
Отдельные части суспензии (аликвоты) каждого разведения смешивают с расплавленным агаром при
температуре, нс превышающей 45 "С, которые затвердевают на пластине, например, на чашке Петри. Залитую
чашку инкубируют и подсчитывают колонии.
Заливаемые пластины нс отделяют микроорганизмы от элкхмпа. При наличии бактерицидных или
бактериостатических веществ нужно руководствоваться рекомендациями А.4.2.6.1.
А.4.2.6.4 Пластины с распределением суспензии
Определенное количество данного разведения распределяют на поверхности твердой питательной среды
с помощью шпателя.
Количество суспензии, распределенное на поверхности среды,должно быть поглощено средой так. чтобы
образовались отдельные колонии: условие абсорбции определяет объем суспензии, который может использо
ваться на чашке.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться рекомендация
ми A.4.2.6.J.
А.4.2.6.5 Метод наиболее вероятного числа (НВЧ) для серийных разведений
При достаточном количестве злюента может быть сделан ряд последовательных разведений, которые
ииокулируюгея в питательную среду так. что часть инокулированной среды не даст видимою роста при
последующей инкубации. Статистическая обработка числа разведений, в которых наблюдается рост, обеспе
чивает оценку исходного количества микроорганизмов. Таблицы f14]. построенные на основе соответствую
щих статистических положений, позволяют непосредственно определить наиболее вероятное число
микроорганизмов (НВЧ).
Метод НВЧ прост, но диапазон условий культивирования, который может быть использован, ограничен, и
статистическая основа метода делает сто ботсе приемлемым скорее для ориеншровочных. чем для точных опенок.
Если присутствуют бактерицидные или бактериостатические вещества, тх> нужно руководствоваться
рекомендациями А.4.2.6.1.
А.4.2.6.6 Спиральные пластины
Определенное количество суспензии микроорганизмов распределяется на поверхности твердой питатель
ной среды. Распределение происходит с уменьшающейся скоростью по спирали от центра чашки к периферии
с помощью автоматического устройства.
После последующей инкубации число микроорганизмов в исходной суспензии определяется с помощью
специальной счетной сетки и счетной техники, когда основой расчетовявляется вся чашка или обсчитываемый
сектор.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться рекомендация
ми А.4.2.6.1.
Техника спиральных пластин даст воспроизводимые результаты, которые соответствуют результатам,
полученным по методу серийных разведений, и технике распределения суспензии. Благодаря конструкции
устройства, использованию капиллярной трубки и малым объемам метол спиральных пластин в первую очередь
оказывает благоприятное влияние на иыокулированную суспензию, которая хорошо гомогенизируется и
становится свободной от частиц материала.
А.4.2.6.7 Метол НВЧ для твердых образной
Метол НВЧ может быть применен к небольшим отдельным образцам. Метод применим при достаточно
низкой бионагрузке на образец и и случае, когда часть образцов, непосредственно введенных и питательную
среду, нс лает роста при инкубации. Результаты могут быть «пенены по А.4.2.6.5. Для некоторых продуктов
может быть подходящим введение более чем одного обратна в каждую порпию среды роста.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться рекомендация
ми А.4.2.6.1.
А.4.2.7 Другие методы индикации микроорганизмов
Для определения бионагрузки, кроме метода подсчета колоний, могут применяться методы измерения
метаболической активности (например, измерение сопротивления или эпифлуоресценция). Такие методы
называют непрямыми. Эти методы должны быть калиброваны по числу колоний. ’Эти методы требуют
относительно большого числа микроорганизмов в элюенте пробы, что ограничивает их применение. Как
правило, минимальный предел обнаруживаемых части превосходит 100 колонисобразуюших единиц (КОЕ).
А.4.3 Выбор питательных сред и условий инкубации
При выборе питательных сред и условий инкубации нужно учитывать следующее:
a) ни одна комбинация среды и условий инкубации нс может обеспечить роста всех микроорганизмов,
однако некоторые комбинации могут дать более представительные результаты, чем другие;
b
) валилационные испытания могут потребовать более широкого диапазона питательных сред и условий
инкубации, чем в текущем процессе;
c) прямой посев на селективные среды может не дать роста микроорганизмов, подвергшихся физиологи
ческому стрессу, или поврежденных микроорганизмов:
II