ГОСТ Р ИСО 11737-1-2000
Т а б л и ц а А.1 — Примеры элюентов и разбавителей
Раствор
Копиейграиия в ноле
Применение
Рингера
0,25%
Общее
Пептон
0.1-1.0%
Общее
Пептонный буфер
0.067 М фосфат
0,43 % хлористый натрий
0,1 % пептон
Общее
Фосфатный буфер
0,02 М фосфат
0.9 % хлористый натрий
Общее
0,25-0.9 %
Общее
Хлористый натрий
Кальгон Рингера
0.25%
Растворение тампонов с алназ
иатом кальция
Тиосульфат Рингера
0,25%
Нейтрализация остатков хлора
Вода
Растворениеводяныхпроб,
приготовление изотонических
растворов растворимых материалов
до начала подсчета
П р и м е ч а н и е — Этот перечень нс является исчерпывающим. Детергент, такой как полисорбат
(Твин 80), может добавляться к элюенгу и к разбавителю. Как правило, используют концентрацию от 0,01 до
0,1 %, в зависимости от специфики применения. Соответствующую концентрацию детергента в каждом
случае выбирают с таким расчетом, чтобы избежать ценообразования.
А.4.2.6 Перенос в питательную среду
А.4.2.6.1 Общие положения
Процедура приготовлении суспензии микроорганизмовдолжна предусматривать контроль наличия живых
микроорганизмов в элюснтс. который должен проводиться одним из методов, описанных в А.4.2.6.2—А.4.2.6.7.
Перед переносом в питательную среду может потребоваться дополнительная обработка, чтобы дезагреги ровать
микроорганизмы и таким образом уменьшить разброс. В некоторых случаях метод, используемый для
выделения микроорганизмов из контролируемого образна, может разрушать агрегаты. В некоторые моменты
может быть необходимо проведение отдельной обработки.
Если в элюснтс присутствуют бактерицидные или бактериостатические вещества, их концентрация может
быть снижена до значения, не оказывающего никакого влияния на микроорганизмы при растворении,
фильтрации или химической инактивации. Присутствие бактерицидных или бактериостатических веществ
может по этой причине оказать влияние на выбор метода подсчета.
В методе подсчета колоний нужно принимать во внимание верхний предел колоний, поиатнюшихся при
инкубировании. Он должен быть таким, чтобы каждый живой микроорганизм мог быть выявлен как видимая
колония, нс испытывающая вредного влиянии находящихся рядом микроорганизмов. Присутствие вотокон
может препятствовать образованию дискретных колонии и, следовательно, затруднять подсчет.
А.4.2.6.2 Мембранная фильтрация
Мембранная фильтрация и последующая инкубация фильтра на подходяшей питательной среде для
получения видимых колоний является эффективным средством оценки контаминации. Мембранные фильтры с
соответствующими размерами пор способны удалять микроорганизмы из элюента, проходящего через них.
Фильтр с порами размером 0,45 мкм обычно используется для улучшения условий образования колоний. Ятя
инкубации мембранный фильтр может быть положен либо на поверхность агара, либо на абсорбирующую
прокладку, пропитанную питательной средой. Образованные на поверхности мембранного фильтра колонии
могут быть подсчитаны и изолированы для их классификации.
Мембранная фильтрация особенно пригодна для суспензии с низкой концентрацией микроорганизмов.
Фильтрацию используют, если жидкий субстрат содержит бактерицидные или бактериостатические
вещества. Микроорганизмы удаляются из элюента и м о т быть отмыты на мембранном фильтре перед
инкубированием. Некоторые тины мембран могут абсорбировать или выделять вещества, которые могут
ингибировать рост микроорганизмов, поэтому важно, чтобы использовались только мембранные фильтры,
соответствующие целим подсчета микроорганизмов. Мембранный фильтр и элюент должны быть совместимы.
Обычно применяется вакуум или иногда сжатый воздух. Нужно проявлять осторожность, чтобы избегать
избыточного противодавления, которое может вызвать изменение или повреждение мембранного фильтра.
П р и м е ч а н и е —Мембранная фильтрация алюеитов. содержащих остатки волокнистых продуктов,
может быгь •затруднена, так как мембранный фильтр может быть блокирован.
10