ГОСТ 33692—2015
7.7 Определение массовой доли коллагена к массе общего белка
7.7.1 Сущность метода
Метод основан на выделении оксипролина в кислотном гидролизате пробы, нейтрализации гидро
лизата. окислении его хлорамином-Т, с образованием соединения красного цвета и фотометрическом
измерении оптической плотности при длине волны (558 ± 2) нм и последующем пересчете на коллаген.
7.7.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 специального или высокого класса точно
сти с пределом допускаемой абсолютной погрешности не более ± 0.001 г.
Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры на уровне 60 °С.
Баня песчаная.
Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558 ± 2) нм. или фотоэлектро
колориметр со светофильтром, имеющим максимум поглощения при длине волны (558 ± 2) нм, укомплек
тованный кюветами стеклянными с длиной рабочей грани 10 мм.
pH-метр с диапазоном измерения от 4 до 9 ед. pH с погрешностью измерения ± 0.05 ед. pH.
Колбы мерные с одной отметкой 2-100-1.2-250-1, 2-1000-1 по ГОСТ 1770.
Колбы конические Кн 1-250-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
Пробирки П2-10-90 ХС по ГОСТ 25336.
Воронки В-56-80 ХС или В-75-110 ХС или BP-56 ХС по ГОСТ 25336.
Холодильники ХПТ 2-400-29/32 ХС или 2-600-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
Пипетки градуированные 1-1-1-1; 1-1-1-2; 1-1-1-5:1-1-1-10 по ГОСТ 29227.
Фольга алюминиевая по ГОСТ 745.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Часы электронно-механические по ГОСТ 26272.
Кислота соляная по ГОСТ 3118.
Гидроокись натрия по ГОСТ 4328.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х. ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, х. ч.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199, ч. д. а.
Термометр жидкостной по ГОСТ 29224.
Термометр ртутный по ГОСТ 28498.
Бумага индикаторная универсальная, интервал измерения pH 0—12.
Парадиметиламинобензальдегид, х. ч.
Хлорамин-Т, ч. д. а
Хлорамин-Б. ч. д. а.
Кислота хлорная, х. ч.
Спирт пропиловый. х. ч.
Спирт изопропиловый, х. ч.
L-Оксипролин, с массовой долей основного вещества не менее 99,4 %.
7.7.3 Подготовка к испытанию
7.7.3.1 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с(НС1) = 6 моль/дм3
Смешивают один объем соляной кислоты (
p
jq
= 1,198 г/’см3) с одним объемом дистиллированной
воды.
7.7.3.2 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации c(NaOH) = 10 моль/дм3
Растворяют 400 г гидроокиси натрия в 700 см3дистиллированной воды. Охлаждают и количествен
но переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3,доводят объем до метки дистиллированной водой
и перемешивают.
7.7.3.3 Приготовление буферного раствора (pH = 6.0)
50 г лимонной кислоты, 12 см3уксусной кислоты. 120 г уксуснокислого натрия. 34 г гидроокиси на
трия растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 см3, доводят объем до метки дистиллированной
водой и перемешивают. Полученный раствор смешивают с 200 см3дистиллированной воды и 300 см3
пропилового или изопропилового спирта. Проводят измерение pH полученного раствора на pH-метре в
случае необходимости доводят pH до 6.0 ед. pH раствором гидроокиси натрия или уксусной кислотой.
7.7.3.4 Приготовление реактива для окисления
12