ГОСТ Р 56145—2014
после стерилизации его значение составляло (7.3 + 0.2) ед. pH. разливают в пробирки по 5-7 см3 и
автоклавируют 15 мин при температуре 121 вС.
5.3.17.13 Среды Гисса с маннитом, рамнозой. ксилозой
Среды Гисса с маннитом, рамнозой. ксилозой — для изучения ферментативных свойств и иден
тификации бактерий
Listeria monocytogenes
готовят по ГОСТ 10444.1.
5.3.17.14 Среды для определения лецитиназной активности листерий (лецитин-агар)
Готовят основы сред в двух вариантах:
1-й вариант — к среде ГРМ-агар (ГРМ No 1). приготовленной по 5.3.11, перед стерилизацией до
бавляют активированный уголь, растертый до порошкообразного состояния, до концентрации 0,5 %
(ввс/объем).
2- й вариант — готовят аналогично, но без добавления активированного угля.
К стерилизованной и охлажденной до 40 °С — 50 "С первому варианту основы питательной
среды в условиях асептики добавляют эмульсию желтка куриного яйца, приготовленную по
ГОСТ 32031, в количестве 5 % по объему. Разливают в чашки Петри по 20 см3 и подсушивают при 37 °С.
Аналогично готовят среду на втором варианте основы с добавлением желтка, но без добавле
ния активированного угля.
5.3.17.15 Среды для проведения КАМП (CAMP) теста для идентификации бактерий
Listeria
monocytogenes
готовят по ГОСТ 31031.
5.3.17.16 Раствор с объемной долей перекиси водорода 3 % готовят по ГОСТ 10444.1.
5.4 Приготовление разведений продуктов для посева
5.4.1 К 10 г лабораторной пробы добавляют по 10 г (см3) стерильный изотонический раствор
хлористого натрия или разбавленный фосфатный буферный раствор до достижения общей массы
или объема пробы 100 г (см3), после чего смесь тщательно перемешивают до гомогенного состояния
вручную круговыми движениями либо с использованием аппарата для встряхивания жидкостей или
гомогенизатора перистальтического типа. Пипетку осторожно промывают до 10 раз полученной сме сью
до верхнего уровня имеющихся на ней делений. Получают первое разведение продукта (1*101).
5.4.2 При анализе сыров и творожных продуктов, обогащенных пробиотическими микроорганиз
мами. для приготовления разведений используют раствор лимоннокислого натрия по 5.3.7.
5.4.3 Первое разведение для сухих кисломолочных продуктов и БАД на основе пробиотических
микроорганизмов, высушенных со средой культивирования, нейтрализуют. Для этого на каждые 10
см3 разведения в стерильную посуду добавляется 1.0
cmj
стерильного раствора натрия гидрокарбо
ната с массовой концентрацией 100 г/дм3; содержимое перемешивают с использованием стерильных
приспособлений или шуттель-аппарата. Общая масса первого разведения пробы с разбавителем и
нейтрализующим раствором должна составлять 100 г.
5.4.4 При анализе продуктов, обогащенных пробиотическими микроорганизмами в капсулиро
ванном виде, первое разведение капсул суспендируют. Для этого 10 г образца капсул переносят в 90 г
разбавленного фосфатного буферного раствора, нагретого до температуры не выше 40 СС. Допус
кается использование гомогенизатора перистальтического типа, время гомогенизации 2 — 2.5 мин.
5.4.5 При анализе продукции, обогащенной пробиотическими микроорганизмами в микрокапсу-
лированной форме, при приготовлении первого разведения необходимо освободить микроорганизмы от
покрытий путем растворения последних.
5.4.6 В случае покрытия из полисахаридов, необходимо энергичное смешивание в течение IQ-
15 мин круговыми движениями.
5.4.7 В случае двойного покрытия из полисахаридов и белков/пептидов перемешивание первого
разведения должно продолжаться не менее 21 мин: осторожное размешивание (без образования пу
зырьков) в течение двух минут, отстаивание в течение пяти минут, операции повторяют три раза для
полного растворения покрытия.
5.4.8 Далее проверяют состояние покрытий под микроскопом (*1000). Если покрытия полностью
не растворились или клетки остались в агрегированном состоянии, процедуру повторяют.
5.4.9 При необходимости последующие десятикратные разведения продукта готовят, добавляя
в 9
cmj
стерильного разбавителя (изотонического раствора хлористого натрия, разбавленного фос
фатного буферного раствора или раствора лимоннокислого натрия) по 1 см3из предыдущего
разве дения продукта. При этом смесь каждый раз тщательно перемешивают, осторожно промывая
пипетку
17