ГОСТ ISO 15163—2014
7 Методика
7.1 Проверка
Перед проведением анализа проверяют ферментный препарат на отсутствие основных молоко
свертывающих ферментов не животного происхождения, используя подходящий метод (см. приложе
ние А). Проверку можно не проводить, если известно, что фермент содержит химозин и пепсин только
животного происхождения.
7.2 Подготовка чистой колонки со смолой Fractogel
Готовую к использованию суспензию смолы Fractogel (4.1) после дегазации в вакууме разливают
непосредственно из бутыли поставщика или. используя ультразвуковую водяную баню, заполняют ею
колонку(5.3), установленную вертикально, с открытымвыпуском, пока слой осажденной смолы Fractogel
недостигнет высоты от 4.5 до 5.5 см. Во время проведения процедуры гелевая основа не должна быть
сухой.
Закрывают выпускную трубку. Погружают конец впускного отверстия трубки перистальтического
насоса влабораторныйстакансбуферным раствором I(4.12.1). Подсоединяюттрубкуадаптера котвод
ной трубке насоса. Регулируют скорость потока до (1.3 i 0,1) см3/мии. Заполняют трубку адаптера
буферным раствором I (4.12.1). не превышая общий внутренний объем трубок 1.5см3.
Закрывают колонкуадаптером, какуказано изготовителем колонки. Сжимаютадаптером несколь
ко миллиметров гелевой основы, чтобы ликвидировать свободное пространство над ней. Следует
предупредить попадание пузырьков воздуха в колонку. Промывают колонку буферным раство
ром I(4.12.1) в течение 5 мин при скорости потока 1.3 см3/мин.
7.3 Регенерация и уравновешивание смолы Fractogel в колонке
После подготовкиновойколонкиипосле каждогоцикла проводятрегенерацию иприведение врав
новесие смолы Fractogel (4.1) в колонке следующим способом.
Регенерируют смолу Fractogel в колонке, используя не менее 15 см3 буферного раство
ра IV(4.12.4),подаваяегов течение 11—12мин соскоростью потока 1.3см3/мин. Колонку приводятврав
новесие. используя неменее40 см3буферного раствора I (4.12.1), подаваяего в течение 30 мин. После
этого колонка готовадля загрузки пробыдля анализа.
Одну и туже колонку можноиспользоватьболее 20раз. Послечастого использования колонкуочи
щают более тщательно, промывая ее раствором NaOH молярной концентрации 0.1 моль/дм3в течение
10мин. азатем водой в течение 10мин.Затемпроводятобычнуюпроцедурурегенерациии приведенияв
равновесие, какописано выше.
7.4 Хранение колонки со смолой Fractogel
Если колонкадолжна храниться болееодной недели, еепромывают 15см320 %-ногоэтанола (4.8)
с помощью перистальтическогонасоса(5.1). Хранятколонкусплотнозакрытыми впускнымиивыпускны
ми каналами.
Колонкуможнохранитьнесколькомесяцев прикомнатнойтемпературе, стараясьизбегатьпопада
ния прямогосолнечного света.
7.5 Приготовление пробы для испытания
7.5.1 Общие требования
Жидкие пробы ферментных препаратованализируют послеподготовки по 7.5.2.
Пробу порошковых ферментных препаратов готовят следующим образом. Сухие пробы перед
обессоливанием растворяют вподходящем количествебуферного раствора I (4.12.1)или с использова-
ниембуферногорастворасрН5.5(см. IS011815|IDF 157). чтобы получитьрастворс общей молокосвер
тывающей активностью 200 ММЕ/см3.
Перед обессоливанием определяют время свертывания растворенной пробы фермента в соот
ветствии с ISO 11815|IDF 157. Проводят приблизительную оценку активности пробы, выраженную в
ММЕ/см3.устанавливая ее относительно эталона сычужного фермента, чтобы определить количество
пробы на колонку (7.6.1 или 7.6.2).
Если результаты выражаются в миллиграммах на дм3, при определении времени свертывания
пробы сычужного фермента проводят два параллельных определения в соответствии с ISO
11815|IDF 157. В этом случае измеряют время свертывания одновременно или в быстрой последо
вательностидо и после обессоливания.
Перед внесением пробы для анализа в колонку ее обессоливают путем диализа (7.5.2) или
гель-фильтрации (7.5.3).
4