ГОСТ ISO 15163—2014
7.5.2 Обессоливание путем диализа
Диализную трубку (4.10) погружают в кипящую воду на 5 мин и промывают ее внутри и снаружи
водой.
Диализ5 см3приготовленнойанализируемой пробы (7.5)(активностьюоколо 900 ММЕ) поотноше-
ниюк500 см3буферного раствора I(4.12.1)проводятпри температуре4 °С втечениеот5 до20ч.Диализ
ную трубкуочень крепкосжимают рукой, чтобы перекрытьее в целяхсокращения разбавления, которое
происходит во время диализа. Во время диализа буферный раствор перемешивают магнитной
мешалкой (5.4).
Если результаты выражаются в миллиграммах на дм3, при определении времени свертывания
пробы сычужного фермента, подвергнутой диализу, проводятдва параллельных определения в соот
ветствии с ISO 11815|IDF 157.
7.5.3 Обессоливание путем гель-фильтрации
Следуют инструкциям поставщика.
Колонку обессоливания (4.11) уравновешивают буферным раствором I (4.12.1). На колонку
используют 3,3 см3приготовленной пробы (7.5). Элюируют пробу буферным раствором I(4.12.1) объе
мом 4,0 см3.
Для проб с низким содержанием химозина или пепсина иногда необходимо выполнить вышеука
занную процедуру дважды, чтобы получить достаточную активность фермента и иметь возможность
адекватно определить низкое содержание компонента.
Если результаты выражаются в миллиграммах на дм3, при определении времени свертывания
пробы сычужного фермента путем гель-фильтрации проводят два параллельных определения всоот
ветствии с ISO 11815JIDF 157.
7.5.4 Срок службы колонки
Чтобы продлить срок службы колонок и избежать закупоривания, рекомендуется выполнять регу
лярную очисткуобессоливающихколонок.
После каждого дня использования всю колонку промывают чистой водопроводной или дистилли
рованной водой. В колонку вводят5 см3 раствора мочевины молярной концентрации8 моль/дм3 изатем
сливают. Промывают колонку один раз водопроводной водой и уравновешивают, пропуская через
колонкуполный объем резервуара с буферным раствором I(4.12.1).
Хранят уравновешенные колонки в прохладном месте с небольшим количеством буферного рас
твора над поверхностью геля. При длительном хранении рекомендуется хранить колонку в буферном
растворе или дистиллированной воде с добавлением консервантов (см. инструкцию поставщика). При
соблюдении этой процедуры можно использовать каждую колонкудо двух лет или пока значительно не
снизится скорость потока.
7.6 Анализ обессоленного сычужного фермента
7.6.1 Разделение химозина и пепсина в обычной колонке. Ручной ввод
Послеприведения колоноквравновесиевсоответствиис7.3с помощьюнасоса (5.1) в колонкувво
дят определенное количество обессоленной пробы для анализа (7.5.2 или 7.5.3), погружая конец вход
ной трубки насоса в трубкус пробой. Устанавливают скорость потока 1,3 см3/мин.
Количествопробыдолжно бытьдостаточным, чтобы после разделениявремясвертывания наибо
лее слабойфракциисоставлялоот 350с до 550 с ичтобы можно былообнаружитьактивностьв промежу
точной фракции или в элюате после второй фракции. В большинстве случаев объем пробы после
обессоливания составляет от 3 до 5 см3. При этом общая молокосвертывающая активность на колонку
недолжна превышать900 ММЕ. Если результаты выражаются вмиллиграммахнадм3, необходимоточ
нознатьобъем пробы, добавляемыйвколонку. Этогонетребуется, еслирезультаты выражаютсятолько
в процентах.
Когда проба почти полностью введена во входную трубку, промывают трубку для анализа буфер
ным раствором II объемом 1см3(4.12.2). Следует избегать попадания пузырьков воздуха в трубку. Пов
торяют промывание после того, какпервый раствордля промывки введен во входную трубку.
Погружают конец входной трубки в стакан, содержащий не менее 50 см3 буферного раство
ра II (4.12.2). Собирают первую фракцию элюата в мерную колбу с одной меткой вместимостью
50 см3(5.5). Собирают точнодо метки 50 см3илидо объема 47 см3. В последнем случав объем доводят
до метки буферным раствором II (4.12.2).
Затем собирают пробу в количестве 3 см3в небольшой стакан, которую обозначают как промежу
точную фракцию.
5