ГОСТ ISO 15163—2014
П р и м е ч а н и е — Е,.Е
2
иЕзМОгутбытьтремяразнымисычужнымиферментамиилиоднимферментомв
трех разных разведениях, т. е. неразведенные. разведенные в 20 и 100 раз соответственно.
А.5.2.3 Введение проб
нужную лунку. Вводят антисыворотку в центральную лунку, эталонный фермент — в верхнюю лунку, а пробу для
анализа и два разведения — в три другие лунки (см рисунокА.1). Затем оставляют пластинки в атмосфере, насы
щенной водяными парами, при комнатной температуре на период от 10до 15 чипи следуют указаниям поставщика
антисыворотки и эталонных ферментных растворов.
А.5.3 Окрашивание пластин (необязательно)
Рекомендуется окрашивать пластины, таккакпреципитатстановится чище ион может проявиться в большей
степени.
A.S.3.1 Приготовление красителя
Растворяют 5г красителя голубогобриллиантовогокумасси (А.4.6) в 1дм3растворителя, приготовленного из
этанола (А.4.3), уксусной кислоты (А.4.4) и воды в объемах 4.5 + 1.0 ♦ 4,5 соответственно. Нагревают полученный
раствор до 60 °С и фильтруют.
А.5.3.2 Промывание и окрашивание пластин
Каждую пластину покрываютодним слоем фильтровальной бумаги и несколькими слоями (например. 0.5см)
мягкой абсорбирующей бумаги, предварителоно слегка спрессовав ее (например, с помощью книг) в течение не
менее 10мин. Бумагу удаляют и вымачивают пластину а растворе хлорида натрия массовойдолей 9 г/дм3(А.5.1.1)
более 1 ч. Повторяют процедуру прессования в течение 10 мин. Промывают пластину раствором хлорида натрия
массовойдолей 9 г/дм3 при комнатной температуре всю ночь.
Пластину опять прессуют и вымачивают в дистиллированной воде в течение 30 мин. После вымачивания
пластину заново прессуют и высушивают ее горячим воздухом.
Пустые лунки геля заполняют дистиллированной водой, чтобы предотвратить растрескивание геля во время
прессования. Фильтровальную бумагу с геля удаляют после каждого прессования. Процедуру промывания можно
изменить, используя более длительное время для промывания и меньше или совсем не применяя прессование
геля, или используя бопее короткий промежуток времени промывания и более частое прессование геля (см. также
инструкции поставщика).
Вымачивают пластину в красителе (А.5.3.1) не менее 15мин.
Обесцвечивают пластину раствором этанола, уксусной кислоты и воды в объемах 4.5 ♦ 1.0 ♦ 4.5 соотве
тственно. который применяютдля приготовления красителя (А.5.3.1).Допускается послеобесцвечиванияпластину
промыть водой и высушить горячим воздухом.
А.6 Интерпретация результатов
Кривые преципитации могут быть отмечены непосредственно после инкубации в виде матово-белой линии
преципитации, но преципитат часто становится более заметным после окрашивания.
Возникновение линии преципитации между лункой, содержащей антитело против фермента А. и лункой,
содержащей пробудля анализа Е, показывает присутствие ферментаА в пробе Е. Между линией преципитации эта
лонного фермента и линией преципитации пробы должна быть непрерывность (см. рисунокА 2).
РисунокА.2 — Пример результатов двойной иммунодиффуэии
12