ГОСТ ISO 15163—2014
Приложение А
(справочное)
Количественное определение молокосвертывающих ферментов в промышленных коагулянтах
методом двойной иммунодиффузии
А.1 Общие требования
Цель данного метода — определение возможного наличия одного или нескольких из следующих шести коа
гулирующих ферментов: химозина, говяжьего пепсина, свиного пепсина, ферментов из Rhizomucor(Mucor) mtehei.
Rhizomucor (Mucor) pusilius и Cryphonectria (Endothta) parasitica в ферментных препаратах.
П р и м е ч а н и е — Метод, рассматриваемый в данном приложении, является дополнением к методуопре
деления содержания химозина иговяжьего пепсина в ферментных препаратах из сычугов теляти крупногорогатого
скота, при условии, что этот метод позволяет установить, тольколи химозин и говяжий пепсин присутствуют в таких
экстрактах или в них также имеются наиболее распространенные молокосвертывающие ферменты (кроме химози на и
говяжьего пепсина). В последнем случае хроматографический метод неприменим. Не все молокосвертываю щие
ферменты можно идентифицировать с помощью этого метода, однако идентификация наличия химозина и
говяжьего пепсина иотсутствие наиболее распространенныхзаменителейсычужного ферментадаютвысокую уве
ренность втом. чтоанализируемый ферментный препарат является натуральным ферментным препаратом живот
ного происхождения.
Данный метод применим: а) ко всем ферментам из говяжьих и свиных желудков, способствующим коагуля
ции. и Ь) к ферментам, способствующим коагуляции и произведенным в промышленных целях из особых штаммов
грибов Rhizomucor (Mucor) miehei. Rhizomucor(Mucor) pusitlus и Cryphonectria (Endothta) parasitica.
A.2 Принцип
В агарозной среде преципитация специфических антигенов-антител позволяет визуально определить нали
чие вышеуказанных ферментов в ферментных препаратах (10). Первый шаг — наносят слой агарозы на пластинку.
После затвердения агарозы в слое агарозного геля вырезают маленькие пунки. одни из которых заполняют антиге
ном в разныхконцентрациях, адругие — антисывороткой. Каждый из антагонистов мигрируют понаправлениюдруг
к другу (двойная иммунодиффузия) и образуются иммунные комплексы, которые преципитируют в полях геля и ста
новятся видимыми каклинии преципитации, когда относительные концентрацииантигена иантисыворотки являют
ся оптимальными.
А.З Оборудование и химическая посуда
Используют обычное лабораторное оборудование и химическую посуду, в частности, нижеприведенные.
А.3.1 Стеклянные пластинки (10 х 10 см)или покрытая агарозой полиэфирная пленка «Gelbond». имеется в
наличии в FMC Corporation. Вю Products, Rockland. Maine 04841. USA1).
A.3.2 Микропипетки вместимостью 0.004 см3 и 0.015 см3.
А.3.3 Штампы размером диаметра 2.5 и 4.0 мм.
А.3.4 Пластмассовые подносы для окрашивания и промывания пластинок.
А.4 Реактивы
Используют реактивы только установленного аналитического качества и дистиллированную или деминера
лизованную воду, либо воду эквивалентной чистоты.
П р и м е ч а н и е — Любое упоминание или информация о праве собственности в настоящем стандарте
приведены для удобства пользователей настоящегостандарта ине являютсяподтверждением таких прав состоро
ны ISO или IDF.
А.4.1 Агароза. Indubiose А37 (IBF). тип HSA (Litex)2) или эквивалентный.
П р и м е ч а н и е — Выбор агарозы не является решающим.
А.4.2 Хлорид натрия (NaCI).
11 «Gelbond» является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Информация приведена для
удобства пользователей настоящего стандарта и не свидетельствует о поддержке этого продукта со стороны ISO
или IDF.
2>Indubiose А37 — это пример имеющегося в продаже подходящего продукта. Информация приведена для
удобства пользователей настоящего стандарта и не свидетельствует о поддержке этого продукта со стороны ISO
или IDF.
10