ГОСТ ISO 15163—2014
А.4.3 Этанол. 95 %.
А.4.4 Уксусная кислота. 100% (кристаллизованная).
А.4.5 Моноспецифические антитела и эталонные ферментные растворы
Моноспецифические антитела и эталонные ферментные растворы вместес необходимыми инструкциями по
применению можно получить в INRA (FR) или CHR. HANSEN (DK)1).
А.4.6 Кумасси бриллиантовый голубой, краситель R-250 или Serva Blue R2).
А.5 Методика
А.5.1 Приготовление пластин с агарозой
А.5.1.1 Хлорид натрия, массовая доля 9 г/дм3.
Растворяют 9 г хлорида натрия в 1 дм3дистиллированной воды.
А.5.1.2 Раствор агарозы
Добавляют 1г агарозы (А.4.1) к 100 см30.9 %-ного хлорида натрия (А.5.1.1) и растворяют на водяной бане при
температуре 100 3С. Готовят свежий агарозный раствор непосредственно перед использованием.
А.5.1.3 Приготовление пластин с агарозой
После промывания стеклянных пластин этанолом наносят кистью слой агарозы. Как только пленка агарозы
высохнет полностью, устанавливают пластинугоризонтально, пипеткой наносят слой раствора агарозы (А.5.1.2) на
пластину прибО’С иоставляютотвердевать. Толщина слоядолжна составлять 1.5 мм. например,для пластины раз
мером 10 х 10см требуется 15см3 раствора агарозы. Используя покрытую агарозой полиэфирную пленку, наливают
15см3 раствора агарозы на гидрофильную поверхность и оставляют отвердевать.
А.5.2 Диффузия
А.5.2.1 Приготовление проб
Можно анализировать неразведенные пробы, если их концентрация не превышает 200 ММЕ/см3. или анали-
зироватьпробы в разных разбавлениях водой(например. 1 : 20 и 1 : 100). Разводят эталонные ферментные раство ры
в соответствии с указаниями изготовителя, которые прилагаются к поставляемым антигенам и антисыворотке.
А.5.2.2 Приготовление пластин с агарозой
Непосредственно перед началом диффузии вырезают маленькие цилиндрические лунки в слое агарозы,
используя штамп (А.3.3). В соответствии с объемом пробы (см. указания изготовителя) лунки должны бытьдиамет
ром 2.5 или 4.0 мм. Центр лунки с пробой должен располагаться на расстоянии 5 мм от центра лунки с антителом
(см. рисунокА.1).
О
Cti
а
3
ЕзО
©
ОЕ,
ЕзО ®
ОЩ
О
О
О
ЕаEj
Ej
О
Rmp
ъгзг
ElO
®
О Е|
Е3О ®ОЕ,
О
Е*
О
Е*
о
Е*
ЕаО
®
ОЕ,
ЕзО
®
ОЕ,
T — кроличья антисыворотка кхимозииу: 2 — кроличья антисыворотка «говяжьему пепсину: 3 — кроличья антисыворотка к сои-
мому пепсину. 4 — кроличья антисыворотка к протеазе Rhizomucor miohei; 5 — кроличья антисыворотка к протеазе Rhizomucor
pusHlus: в — кроличья антисыворотка к протеазе Cryphoneclria parasitica; Ch — эталонная проба химозина; 8р — эталонная про
ба говяжьего пепсина; Рр — эталонная проба свиного пепсина; Rmp — эталонная проба протеазы Rhizomucormiehei, Rpp — эта
лонная проба протеазы Rhizomucor pusittus; Срр — эталонная проба протеазы Cryphoneclria parasitica; Е, — проба для анализа
(испытуемая проба); Е? — проба для анализа (испытуемая проба); Е^ — проба для анализа (испытуемая проба)
РисунокА.1 — Пример расположения пластин
INRA. place du Champ de Folre. 39800 POLIGNY. France and Chr. Hansen A/S. 1-27 Jernholmen. 2650
HVIDOVRE, Denmark (fax ♦ 45 36 86 77 76) — организации, поставляющие эти продукты.
2) Dye R-250 или Serve Blue R — это пример имеющихся в продаже подходящих продуктов. Информация при
ведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не свидетельствует о поддержке этих продуктов со
стороны ISO или IDF.
11