ГОСТ Р 55298—2012
Пектин, взятый с расчетом, чтобы 100 см3 раствора содержало 1,00 г чистого лектина (в
соответствии с приложением А) всыпают тонкой струей при непрерывном перемешивании в мерную
колбу вместимостью 100 см3, в которую предварительно наливают 25 см3 ацетатного буфера
кислотностью 5.0 ед.рН. Раствор непрерывно перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин
до полного растворения пектина. По истечении этого времени объем раствора доводят до 100 см3
ацетатным буфером кислотностью 5,0 ед.рН тщательно перемешивают и фильтруют через два слоя
марли.
Срок хранения раствора пектина в холодильнике при температуре 4 °С - не более двух суток.
4.4 Подготовка пробы
4.4.1 Отбор проб - по ГОСТ 20264.0.
Анализируемые пробы ферментных препаратов в порошкообразном или жидком виде
используют без предварительной подготовки.
4.4.2 Приготовление основного раствора анализируемой пробы ферментного препарата
В стаканчик для взвешивания шпателем помещают порошкообразный ферментный препарат
для получения анализируемой пробы массой (0.1000 ± 0.0002) г. Жидкий ферментный препарат (1.00
± 0.02) см3вносят в стаканчик пипеткой. Полученную анализируемую пробу ферментного препарата
суспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды и количественно переносят в мерную
колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой при температуре 20
°С и тщательно перемешивают. Приготовленный раствор ферментного препарата является основным
раствором анализируемой пробы.
Срок хранения основного раствора ферментного препарата при температуре 20 сС- не более 1ч.
4.4.3 Приготовление рабочего раствора анализируемой пробы ферментного препарата
Рабочий раствор анализируемой пробы ферментного препарата готовят из основного раствора
по 4.4.2 путем дальнейшего разведения его дистиллированной водой в зависимости от
предполагаемой активности таким образом, чтобы при ее определении показания интерферометра
соответствовали пределу измерений от 400 до 1250 дел (по 4.2.2).
С учетом разведения рассчитывают количество препарата, взятого на анализ.
Каждую пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии в требованиями
ГОСТРИСО 5725-1.
Раствор готовят в день определения. Длительность использования рабочего раствора
ферментного препарата не должна превышать 1 ч с момента приготовления во избежание потерь его
ферментативной активности.
4.5 Проведение анализа
Для анализа берут несколько пробирок размером 18 х 200 мм по количеству анализируемых
проб.
4.5.1 В каждую пробирку размером 18 х 200 мм вносят по 10 см3субстрата 1 %-ного раствора
пектина (см. 4.3.3). Содержимое пробирок прогревают в ультратермостате при температуре (30.0 ±
1.0) °С в течение 5 мин.
4.5.2 В пробирки с субстратом добавляют по 5.0 см3рабочего раствора анализируемой пробы
ферментного препарата по 4.4.3, предварительно прогретого при температуре 30 °С. тщательно
перемешивают и включают секундомер, отмечая начало ферментативной реакции. Реакционную
смесь инкубируют при температуре (30.0 ± 1.0) °С в течение 1 ч (с точностью, определяемой по
секундомеру от начала ферментативной реакции).
4.5.3 По окончании реакции в пробирки с реакционной смесью добавляют 1,0 см3сернокислого
цинка для инактивации фермента и осаждения продуктов гидролиза, вынимают из термостата,
тщательно перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. Полученный фильтрат должен быть
прозрачным.
4.5.4 Одновременно готовят контрольный раствор. Для этого в пробирки наливают 1.0 см3
сернокислого цинка, добавляют 5.0 см3анализируемого ферментного раствора и 10 см3 субстрата,
интенсивно перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор должен быть прозрачным.
4.5.5 Полученные анализируемый и контрольный растворы используют для измерения разности
показателей преломления на интерферометре (см. 4.2.2). Полученные показатели преломления
используют для расчета лектолитической активности.
4.6 Обработка результатов
4.6.1 Расчет лектолитической активности в анализируемой пробе
Пектолитическую активность в анализируемой пробе ферментного препарата вычисляют по
формулам
- для порошкообразного препарата в ед.ПкС/г
0.06425 л + 19.62
5