ГОСТ Р 55298—2012
6.6.1 В мерную колбу вместимость 100 см3вносят 10 см31.0 %-ного раствора пектовой кислоты
и помещают в термостат с температурой 30 °С. Через 10 мин приливают в колбу от 1 до 5 см3
ферментного раствора в зависимости от ферментативной активности, тщательно перемешивают и
отмечают время по секундомеру для проведения гидролиза.
6.6.2 Реакционную смесь инкубируют в термостате с такой продолжи-тельностью. чтобы степень
гидролиза пектовой кислоты находилась в пределах 20 % и не более (см. формулу 12).
Продолжительность инкубации зависит от ферментативной активности исследуемого препарата
и представлена в таблице 1.
Продолжительность инкубации, мин
Т а б л и ц а 1
Активность препарата,
ед/г или ед/см3
100
101-250
251 - 500
501 - 750
751 -1250
1251 - 1500
45
30
20
15
10
7.5
По истечении времени инкубации в колбу добавляют 1.8 см3 раствора углекислого натрия
молярной концентрацией 1.0 моль/дм3и 10 см3раствора йода молярной концентрации 0.1 моль/дм3.
6.6.3 Растворы тщательно перемешивают, закрывают стеклянными пробками и оставляют в
темном месте на 20 мин. Затем к реакционной смеси приливают 2.0 см3раствора серной кислоты,
молярной концентрации 2 моль/дм3, интенсивно перемешивают и оттитровывают избыток йода
раствором тиосульфата натрия молярной концентрации 0,05 моль/дм3с индикатором - 1.0 %-ным
раствором крахмала.
6.6.4 В качестве контроля используют то же количество реактивов, только раствор ферментного
препарата вводят после добавления 1.8 см3 раствора углекислого натрия, непосредственно перед
внесением раствора йода молярной концентрации 0,1 моль/дм3.
6.6.5 При анализе ферментных растворов, величина активности которых неизвестна, берут 50
см31,0 %-ного раствора пектовой кислоты (субстрат) и от 1,0 до 25.0 см3раствора фермента. Объем
раствора фермента менее 25 см3 восполняют дистиллированной водой. Общий объем смеси -75
см. Из реакционной смеси отбирают каждые 5 - 1 0 мин пробы по 15 см3 в колбу, где
предварительно налито 1.8 см3раствора углекислого натрия молярной концентрации 1 моль/дм3. Все
остальные процедуры проводят как описано выше.
6.7 Обработка результатов
6.7.1Для обеспечения точности анализа необходимо, чтобы объем раствора йода молярной
концентрации 0,1 моль/дм3, пошедший на окисление альдегидных групп, образовавшихся при
гидролизе субстрата, не превышал 2.0 см3(предельное значение X).
Это предельное значение X соответствует 20 %-ному гидролизу пектовой кислоты, что видно из
следующего расчета
20 V
X -
----------------------------(
12
)
100 •9,03
где 20 - степень гидролиза 1,0 %-ного раствора пектовой кислоты. %;
V - объем 1,0 %-ного раствора пектовой кислоты, введенной в
реакционную среду, см3;
100 - коэффициент перевода в проценты;
9,03 - объем 1.0 %-ного раствора пектовой кислоты, соответствующий
1.0 см3 раствора тиосульфата натрия молярной концентрации
0,05 моль/дм3(в 10 см3раствора субстрата находится 100 мг
пектовой кислоты), см3;
6.7.2Экзополигалактуроназную активность (Экэо-ПгС) в анализируемой пробе. ед.Экзо-ПгС/г
(для порошкообразного препарата) или ед.Экзо-ПгС/см3 (для жидкого препарата) вычисляют по
формулам
- для порошкообразного препарата в ед.Экзо-ПгС/г
13