ГОСТ Р 55298-2012
В мерную колбу вместимостью 1 дм3 приливают около 300 см3 дистиллированной воды и
медленно вносят 7,2 см3концентрированной соляной кислоты, доводят до метки дистиллированной
водой при температуре 20 °С и перемешивают.
5.3.1.3Для приготовления ацетат-HCI буферного раствора в колбесмешивают растворы
уксуснокислого натрия (раствор А) и соляной кислоты (раствор Б) в соотношении 2 : 0.5, создавая
кислотность смеси, равное5,0 ед.рН. При необходимости доводят кислотность раствора до
5.0 ед. pH одним из исходных растворов.
Срок хранения буферного раствора в закрытой стеклянной посуде при температуре 4 вС - не
более 1 мес.
5.3.2 Приготовление пектовой кислоты (субстрат)
30.0 г свекловичного пектина заливают 600 см3дистиллированной воды и оставляют на ночь в
холодильнике при температуре 4 °С для набухания и растворения. Затем при температуре 20 сС
добавляют 300 см3 0.5 н раствора гидроокиси натрия для полного растворения пектина и снижения
вязкости раствора. Фильтруют на воронке Бюхнера через два слоя марли с проложенной ватой.
Далее добавляют к фильтрату еще 300 см30.5 и раствора гидроокиси натрия и оставляют
для омыления на 1 ч в холодильнике при температуре 4 °С. Через 1 ч осаждают пектовую кислоту 900
см30.5 н раствора соляной кислоты. Выпавшую кислоту сразу отжимают через бязь, помещают в
стакан и добавляют 70 %*ный этиловый спирт, тщательно перемешивают до растворения комков и
снова фильтруют на воронке Бюхнера через бязь. Далее продолжают промывать 50 см370 %-ного
этилового спирта, а затем 50 см2 96 %-ного этилового спирта. Полученную промытую пектовую
кислоту сушат на воздухе при температуре 20 °С. Высушенную кислоту снимают с бязи и растирают в
ступке до получения мелкодисперсного порошка.
5.3.3 Приготовление раствора пектовой кислоты с массовой долей 1,0 % (субстрат)
1.0 г пектовой кислоты в пересчете на абсолютно сухое вещество (см. 4.2.4) всыпают тонкой
струей при непрерывном перемешивании в мерную колбу вместимостью 100 см3, куда
предварительно наливают 25 см2ацетат-HCI буфера кислотностью 5.0 ед.рН. Раствор непрерывно
перемешивают на магнитной мешалке в течение 30 мин до полного растворения. По истечении этого
времени объем раствора доводят до 100 см3ацетат-HCI буфером кислотностью 5.0 ед.рН. тщательно
перемешивают и фильтруют через два слоя марли.
Раствор пектовой кислоты готовят в день проведения анализа.
5.4 Подготовка пробы
5.4.1 Отбор проб - по ГОСТ 20264.0.
Анализируемые пробы порошкообразных или жидких ферментных препаратов допускается
использовать без предварительной подготовки.
5.5 Приготовление основного раствора анализируемой пробы ферментного препарата
В стаканчик для взвешивания шпателем помещают порошкообразный ферментный препарат
для получения анализируемой пробы массой(0.1000 ± 0.0002) г. Жидкий ферментный
препарат (1,00 ± 0.02) см3 вносят в стаканчик пипеткой. Полученную анализируемую пробу
ферментного препарата суспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды и
количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем до метки
дистиллированной водой при температуре 20 еС и тщательно перемешивают. Приготовленный
раствор ферментного препарата является основным раствором анализируемой пробы.
Срок хранения основного раствора ферментного препарата при температуре 20 °С - не более 1ч.
5.5.1 Приготовление рабочего раствора анализируемой пробы ферментного препарата
Рабочий раствор анализируемой пробы ферментного препарата готовят из основного раствора
по 5.5 путем дальнейшего разведения его дистиллированной водой в зависимости от
предполагаемой активности таким образом, чтобы при ее определении процент гидролиза пектина
был в пределах от 10 % до 15 % .
С учетом разведения рассчитывают количество препарата, взятого на анализ.
Каждую пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии в требованиями
ГОСТРИСО 5725-1.
Раствор готовят в день определения. Длительность использования рабочего раствора
ферментного препарата не должна превышать 1 ч с момента приготовления во избежание потерь его
ферментативной активности.
5.6 Проводонио анализа
5.6.1 В сухой вискозиметр Оствальда с размером диаметра капилляра 0.99 мм. погруженный в
термостат с температурой 50 °С. автоматической пипеткой вносят 10 см3 1.0 %-ного раствора
пектовой кислоты, прогревают в течение 5 мин. Через 5 мин автоматической пипеткой вводят
предварительно прогретыйраствор фермента (от 1.0 до 5,0 см3) в зависимости от активности
ферментного препарата. Общий объем реакционной смеси всегда должен быть 15.0 см3, поэтому при
8