ГОСТ 31750—2012
питания так. чтобы электрод верхней камеры являлся анодом и был присоединен к положительному (+)
полюсу источника питания, а электрод нижней камеры — катодом, присоединенным к отрицательно му
(-) полюсу источника питания. Включают источник питания.
В собранную кассету непрерывной струей выливают раствор геля, приготовленного по 4.1.1.4.
После заполнения кассеты сразу вставляют гребенку для образования лунок. Полимеризация заканчи
вается через 5—10 мин. Процедуру рекомендуется проводить при температуре (20
±
2) °С.
Осторожно удаляют гребенку и заполняют лунки раствором ацетатного буфера, приготовленного
по 4.1.1.2 б), для предохранения геля от высыхания.
Предварительный электрофорез проводят при напряжении постоянного тока 100 В в течение 1 ч
для очистки геля, затем раствор ацетатного буфера сливают.
4.1.1.6 Проведение анализа
Камеру для электрофореза заполняют свежим раствором ацетатного буфера, приготовленным по
4.1.1.2 б). С помощью одноканальной микропипетки со сменным наконечником помещают экстракты
анализируемых проб объемом 0.07 см3на дно лунок. Контрольный экстракт помещают в любую лунку,
кроме двух внешних, в одну из лунок вносят 0.05 см3 раствора метилового зеленого, приготовленного по
4.1.1.2 л). Включают источник питания.
Электрофорез проводят при 20 вС. В течение 1ч поддерживают напряжение 100 В, затем его по
вышают до 250 В. Разделение белка проводят в течение 5—6 ч.
После окончания анализа выключают источник питания, сливают верхний слой раствора ацетат
ного буфера и отсоединяют гелевые кассеты от камеры для электрофореза. Открывают кассеты, вы
нимают гели и помещают каждый в пластмассовый контейнер, содержащий 100 см3 окрашивающего
раствора бриллиантового синего, приготовленного по 4.1.1.2 к). Контейнеры устанавливают в смеси
тель и осторожно встряхивают содержимое в течение 4— 18 ч при 50 об/мин. Для усиления окраски гели
промывают дистиллированной водой. Гели помещают в стеклянные поддоны (лотки) и осушают их.
4.1.1.7 Обработка результатов
Визуально исследуют гель или его фотографию и отмечают положение, а также интенсивности
полос в сравнении с характерными полосами спектра контрольного образца, который также был про
анализирован. Идентификацию проводят сравнением полученного спектра с известными спектрами в
соответствии с приложением А.
П р и м е ч ан и е — При фотографировании устанавливают фотоаппарат на штативе над источником флуо
ресцентного освещения, помещают очищенный гель в стеклянный лоток под фотоаппарат и. освещая гель только
снизу, фотографируют его.
4.1.2Определение наличия муки из мягкой пшеницы методом выделения пальмитата
р-ситостерола
Метод определения основан на различной растворимости пальмитата p-ситостерола в ацетоне
при различных температурах.
4.1.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Весы лабораторные с пределом допускаемой погрешности взвешивания
±
0.01 г и
±
0.001 г по
ГОСТ 24104.
Термостат, поддерживающий температуру от 40 °С до 98 °С.
Шкаф сушильный электрический, обеспечивающий нагрев до 150 °С с погрешностью поддержа
ния температуры не более 1 °С.
Фотометр, обеспечивающий возможность измерения интенсивности пропускания света с длиной
волны 640 нм.
Камера холодильная, обеспечивающая поддержание температуры от минус 5 °С до минус 10 °С.
Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498.
Сосуд стеклянный с широким горлом и притертой пробкой вместимостью 500 см3 по
ГОСТ 25336.
Воронка стеклянная диаметром 100 мм по ГОСТ 25336.
Колбы Эрленмейера вместимостью 250 см3.
Колбы мерные вместимостью 50 см3с притертыми пробками по ГОСТ 1770.
Промыватели лабораторные стеклянные по ГОСТ 1770.
Стеклянная палочка по ГОСТ 1770.
Пробирка из пирекса длиной 180 мм и диаметром 18 мм.
Бюретка с краном вместимостью 25 см3по ГОСТ 1770.
5