ГОСТ 31750—2012
4.1.4.2 Подготовка к проведению анализа
а) Отбор пробы
Отбор и подготовка лабораторной пробы — по ГОСТ 14849 или нормативному документу, дей
ствующему на территории государства, принявшего стандарт.
Измельченную пробу просеивают через сита размером отверстий 90 и 250 мкм.
б) Приготовление раствора для экстракции и разбавления
Растворы для экстракции и разбавления готовят непосредственно перед их использованием.
Для приготовления раствора для экстракции 70 %-ной объемной концентрацией этилового спир
та смешивают 7 см3этилового спирта с 3 см3 дистиллированной воды и перемешивают в мерной колбе
вместимостью 10 см3. После этого к раствору добавляют 1% дитиотреитола и перемешивают.
Для приготовления раствора для разбавления образцов смешивают 7 см3 этанола с 3 см3 дис
тиллированной воды и перемешивают в мерной колбе вместимостью 10 см3.
в) Подготовка материалов испытательного комплекта
Из контрольных образцов, входящих в испытательный комплект, а также из лабораторной пробы,
подготовленной по 4.1.4.2 а), отбирают пробу для анализа массой (0.10
±
0.01) г и переносят ее в колбу
Эллендорфа. Добавляют в колбу 1 см3 раствора для экстракции, приготовленного по 4.1.4.2 б), герме
тично ее закрывают и перемешивают образец в колбе путем переворачивания в течение 60 мин. После
этого полученный экстракт для удаления остатков центрифугируют при 2400 об/мин в течение 10 мин
при комнатной температуре до получения прозрачного слоя надосадочной жидкости. Разбавляют надо-
садочную жидкость раствором, приготовленным по 4.1.4.2 б), в соотношении 1:5.
г) Приготовление промывного раствора
Для приготовления промывного раствора разбавляют в мерной колбе вместимостью 1000 см3
концентрат промывного раствора, входящего в состав испытательного комплекта, дистиллированной
водой в соотношении 1: 9.
д) Приготовление конъюгаты пероксидазы антиглиадина
Концентрат конъюгаты, входящий в состав испытательного комплекта, перед применением разво
дят промывным раствором, приготовленным по 4.1.4.2 г) в соотношении 1:19. Для 96 лунок добавляют
0.6 см3концентрата конъюгаты к 11,4 см3промывного раствора.
4.1.4.3 Проведение иммуноферментного анализа
Помещают микропипеткой вместимостью 100 мкл разбавленные по 4.1.4.2 в) экстракты контроль
ных образцов и лабораторной пробы в соответствующие дублированные микролунки испытательного
комплекта.
П р и м е ч ан и е — При каждом отборе проб экстракта используют одноразовый наконечник.
Накрывают планшет и оставляют на 30 мин при температуре (20
±
2) °С. В конце инкубационного
периода аслирируют содержимое всех лунок в первую колонку с помощью промывного аппарата для
микролунок. Затем заполняют лунки для каждой колонки промывным раствором, приготовленным по
4.1.4.2 г), и два раза последовательно повторяют процесс аспирации и заполнения лунок. Таким
об разом. каждая колонка будет промыта три раза. После этого переворачивают планшет и стучат
над несколькими слоями впитывающего материала, чтобы удалить остатки капель промывного
раствора и пузырьки.
Затем в каждую микролунку микропипеткой добавляют 100 мкл приготовленной по 4.1.4.2 д) конъ югаты
пероксидазы антиглиадина, закрывают и оставляют на 30 мин при температуре (20
±
2) °С. По
истечении времени инкубации повторяют процедуру промывки лунок пять раз.
Микропипеткой добавляют в каждую лунку по 100 мкл субстрата ТМВ. входящего в испытатель
ный комплект, накрывают планшет и оставляют при температуре (20
±
2) *С на 30 мин. В лунках с
контрольным первым образцом должна появиться синяя окраска, а в лунках с контрольным третьим
образцом — ярко-синяя окраска.
Для качественного определения наличия муки из мягкой пшеницы в макаронных изделиях доста
точно визуально оценить появление в лунках окраски.
Примечание — Для количественного определенияналичия муки из мягкой пшеницы измеряют поглоще
ние раствора с помощью планшет-ридера. Осторожно размешивают содержимое планшета для того, чтобы оста
новить развитие синей окраски. В каждую лунку равномерно добавляют микропилеткой по 50 мкл стоп-реагента,
входящею в состав испытательного комплекта, при этом окраска меняется на желтую. Проводят контрольное
измерение для воздуха на планшет-ридере с фильтром 450 нм. Переносят 100 мкл из каждой лунки в кюветы
планшет-ридера.добавляютпо900мклдистиллированнойводы, перемешиваютиизмеряют поглощение раствора
в каждой лунке при 450нм относительно воды— контрольного образца.
8