ГОСТ 31750—2012
Масса осадка, собранного с фильтра, колеблется от 1 до 5 мг, и его нельзя взвешивать вместе
с фильтром. Поэтому осадок переносят в предварительно взвешенный с точностью до 0.1 мг сосуд
вместимостью 50 см3путем растворения в этиловом эфире с последующей промывкой фильтра 20 см3
эфира.
После этого эфир высушивают в вытяжном шкафу, досушивают осадок в сушильном шкафу при
температуре не выше 90 °С и взвешивают сосуд с осадком с точностью до 0.1 мг.
Количество ситостерола. приходящееся на навеску в 25 г лабораторной пробы, дает осадок в ко
личестве 4—5 мг в случае наличия муки из одной мягкой пшеницы; количество осадка соответственно
уменьшается в случаях смешивания твердой и мягкой пшеницы.
Полученный раствор пальмитата (^-ситостерола переносят в пробирку из пирекса и помещают
на металлическом штативе в термостат при температуре 90 °С примерно на 2 ч. После охлаждения в
пробирку последовательно вносят 2 см3 трихлорэтилена. 6 см3 уксусного ангидрида и после взбалты
вания — по каплям 0,5 см3серной кислоты с помощью бюретки с краном.
Пробирку закупоривают, перемешивают вручную в течение 20 с для гомогенизации смеси и по
мещают в темное место на 15 мин для появления окраски.
В зависимости от количества пальмитата (1-ситостерола в анализируемых образцах наблюдается
более или менее интенсивная изумрудно-зеленая окраска. В случае если продукт содержит муку из
одной твердой пшеницы, жидкость оказывается неокрашенной.
Для измерения интенсивности окраски анализируемого образца используют фотометр с красным
фильтром при длине волны 640р. Измерение проводят в течение 3—4 мин после извлечения пробирки из
темноты, так как окраска быстро изменяется. Для получения градуировочной зависимости исполь зуют
эфирные растворы пальмитата р-ситостерола, полученные при определениях гравиметрическим
методом.
4.1.4Определение наличия муки из мягкой пшеницы тестовым комплектом BioKits PQC
(экспросс-метод)
Метод основан на обнаружении глиадина из генома D мягкой пшеницы, который отсутствует у
твердой пшеницы. В тестовом комплекте используют моноклональное меченое пероксидазой антитело
для связи с глиадином мягкой пшеницы.
4.1.4.1 Аппаратура, материалы и реактивы
Весы лабораторные с пределом допускаемой погрешности взвешивания
±
0.001 г по
ГОСТ 24104.
Центрифуга с частотой вращения не менее 2400 об/мин.
Колбы Эппендорфа для центрифуги вместимостью 2 см3.
Микропипетка с наконечником, позволяющая дозировать 50. 100. 500 мкл.
Склянка промывная вместимостью 500 см3.
Планшет-ридер микролунок, оснащенный интерференционным фильтром 450 нм.
Спирт этиловый по ГОСТ 18300.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Дитиотреитол (ДТТ).
Сито лабораторное размером отверстий 90 и 250 мкм по ГОСТ 4403.
Испытательный комплект Р.О.С. BioKits;
- контрольные образцы макаронных изделий, изготовленные из муки твердой пшеницы сдобавле
нием 3 %, 5 %, 10 %. и 15 % муки мягкой пшеницы, высушенные при 100 °С;
- контрольный образец макаронных изделий, изготовленный из муки твердой пшеницы сдобавле
нием 4 % — 7 % муки мягкой пшеницы, высушенный при 60 °С;
- концентрат конъюгата пероксидазы антиглиадина в фосфатно-буферном солевом растворе с
ВЭА со стабилизатором и тиомерсалом;
- субстрат, содержащий тетраметилбензидин (ТМВ);
- концентрат промывного раствора — десятикратный концентрат забуференного раствора Tris с
увлажняющим веществом и консервантами;
- кислотный стоп-реагент, содержащий 25 % фосфорной кислоты.
- модуль микролунок, содержащий 12 полосок микролунок (96лунокдля анализа), расположенных
в пластиковой раме.
Допускается использование другой аппаратуры и материалов по метрологическим, техническим
характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.
Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте ив ниже вышеуказанных.
7