ГОСТ ISO 11737-1— 2012
А.5 Валидация методов оценки бионагрузки
А.5.1 Общие положения
Валидация методов оценки бионагрузки приводит к оценке микрофлоры, существующей на
продукте. Для надежной оценки следует валидировать все используемые методы и определить
эффективность регенерации.
А.5.2 Валидация методов удаления микроорганизмов
А.5.2.1 Подходы к валидации
Существуют два основных подхода к валидации эффективности удаления микроорганизмов из
медицинских изделий. Эти подходы следующие:
a) повторяющаяся обработка пробы продукта;
b
) инокуляция продукта определенным количеством микроорганизмов.
Повторяющаяся обработка пробы имеет преимущество при использовании естественной
микробной контаминации, но требует относительно высокой начальной бионагрузки. Второй подход
создает модель системы для испытаний, но ставит проблему применимости к естественной ситуации.
Он может быть пригоден для продуктов с низким уровнем естественной контаминации.
А.5.2.1.1 Метод повторяющихся регенераций
Принцип метода заключается в том. что оценка бионагрузки повторяется до тех пор. пока число
микроорганизмов, полученных при взятии проб, перестает увеличиваться. После каждой повторности
элюеит полностью смывают с продукта или его части и подсчитывают количество микроорганизмов.
Аккумулированные результаты последовательных смывов сравнивают. Этот метод не обладает
необходимой точностью. Нельзя определить точное соотношение между числом выявленных
микроорганизмов и их действительным числом на продукте.
А.5.2.1.2 Метод инокуляции продукта
Для определения эффективности выделения может создаваться искусственная бионагрузка
продукта инокуляцией известного количества выбранных микроорганизмов. Микроорганизмы могут
быть вегетативными клетками или спорами; обычно используют аэробные бактериальные споры.
Применениевегетативныхмикроорганизмовнапрактикезатрудненоиз-запотериих
жизнеспособности при высушивании.
Микроорганизмы, используемые для валидационных исследований, выбирают, исходя из
естественной бионагрузки. Выбранные микроорганизмы могут включать представителей:
a) плесеней;
b
) мезофильныхвегетативныхмикроорганизмов(грам-положительныхи/илиграм-
отрицательиых);
c) спор спорообразующих грам- положительных бактерий.
Использование анаэробных спорообразующих бактерий для валидационных исследований
может представлять большие практические трудности.
Жизнеспособные частицы должны быть установлены во время инокуляции. После высушивания
инокулята, если это допустимо для конкретного продукта, используется выбранный для него метод
выделения микроорганизмов. Отношение полученного титра к титру исходного инокулята дает
эффективность регенерации для конкретного метода и продукта.
Микробная инокуляция имеет такие ограничения, как инкрустация, адгезия суспензии,
группировка клеток в конгломераты и колебания уровня инокулята, и эти ограничения должны
приниматься в расчет при инокуляции продукта.
Инокуляция продуктов из абсорбирующих материалов может совершаться погружением в
суспензию выбранных микроорганизмов. Эта процедура может приводить к равномерному
распределению микроорганизмов на продукте.
А.5.2.2 Элюент
Элюент не должен способствовать росту или ингибировать рост микроорганизмов, удаляемых с
продукта.Чтобыустановитьтакойэффектэлюента,небольшоеизвестноеколичество
микроорганизмов должно быть инокулировано в продукт и оставлено в элюенте на время,
представляющее худшие условия работы с ним. Тогда метод оценки бионагрузки может быть
использован с учетом эффектов ингибирования или способствования росту.
А.5.2.3 Физические методы удаления
Для удаления микроорганизмов из продукта могут быть использованы физические воздействия
(А.4.2.4). Должна быть установлена эффективность этого воздействия на оценку бионагрузки с
использованием небольшого количества микроорганизмов (около 100 КОЕ). Эффективность
определяется путем подсчета микроорганизмов. При этом должны приниматься во внимание
возможныеэффектывоздействияэлюентанавыживаемостьудаляемыхизпродукта
микроорганизмов (А.5.2.2).
13