ГОСТ ISO 11737-1— 2012
Фильтрациюиспользуют,еслижидкийсубстратсодержитбактерицидныеили
бактериостатические вещества. Микроорганизмы удаляются из элюента и могут быть отмыты на
мембранном фильтре перед инкубированием. Некоторые типы мембран могут абсорбировать или
выделять вещества, которые могут ингибировать рост микроорганизмов, поэтому важно, чтобы
использовались только мембранные фильтры, соответствующие целям подсчета микроорганизмов.
Мембранный фильтр и элюент должны быть совместимы.
Обычно применяется вакуум или иногда сжатый воздух. Нужно проявлять осторожность, чтобы
избегать избыточного противодавления, которое может вызвать изменение или повреждение
мембранного фильтра.
П р и м е ч а н и е— Мембранная фильтрация элюентов. содержащих остатки волокнистых
продуктов, может быть затруднена, так как мембранный фильтр может быть блокирован.
А.4.2.6.3 Заливаемые пластины (метод разливок)
Отдельные части суспензии (аликвоты) каждого разведения смешивают с расплавленным
агаром при температуре, не превышающей 45 ®С, которые затвердевают на пластине, например, на
чашке Петри. Залитую чашку инкубируют и подсчитывают колонии.
Заливаемые пластины не отделяют микроорганизмы от элюента. При наличии бактерицидных
или бактериостатических веществ нужно руководствоваться рекомендациями А.4.2.6.1.
А.4.2.6.4 Пластины с распределением суспензии
Определенное количество данного разведения распределяют на поверхности твердой
питательной среды с помощью шпателя.
Количество суспензии, распределенное на поверхности среды, должно быть поглощено средой
так. чтобы образовались отдельные колонии; условие абсорбции определяет обьем суспензии,
который может использоваться на чашке.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться
рекомендациями А.4.2.6.1.
А.4.2.6.5 Метод наиболее вероятного числа (НВЧ) для серийных разведений
При достаточном количестве элюента может быть сделан ряд последовательных разведений,
которые инокулируются в питательную среду так, что часть инокулированной среды не дает видимого
роста при последующей инкубации. Статистическая обработка числа разведений, в которых
наблюдается рост, обеспечивает оценку исходного количества микроорганизмов. Таблицы [14],
построенные на основе соответствующих статистических положений, позволяют непосредственно
определить наиболее вероятное число микроорганизмов (НВЧ).
Метод НВЧ прост, но диапазон условий культивирования, который может быть использован,
ограничен, и статистическая основа метода делает его более приемлемым скорее для
ориентировочных, чем для точных оценок.
Еслиприсутствуютбактерицидныеилибактериостатическиевещества,тонужно
руководствоваться рекомендациями А.4.2.6.1.
А.4.2.6.6 Спиральные пластины
Определенное количество суспензии микроорганизмов распределяется на поверхности твердой
питательной среды. Распределение происходит с уменьшающейся скоростью по спирали от центра
чашки к периферии с помощью автоматического устройства.
После последующей инкубации число микроорганизмов в исходной суспензии определяется с
помощью специальной счетной сетки и счетной техники, когда основой расчетов является вся чашка
или обсчитываемый сектор.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться
рекомендациями А.4.2.6.1.
Техника спиральных пластин дает воспроизводимые результаты, которые соответствуют
результатам, полученным по методу серийных разведений, и технике распределения суспензии.
Благодаря конструкции устройства, использованию капиллярной трубки и малым объемам метод
спиральных пластин в первую очередь оказывает благоприятное влияние на инокулированную
суспензию, которая хорошо гомогенизируется и становится свободной от частиц материала.
А.4.2.6.7 Метод НВЧ для твердых образцов
Метод НВЧ может быть применен к небольшим отдельным образцам. Метод применим при
достаточно низкой бионагрузке на образец и в случае, когда часть образцов, непосредственно
введенных в питательную среду, не дает роста при инкубации. Результаты могут быть оценены по
А.4.2.6.5. Для некоторых продуктов может быть подходящим введение более чем одного образца в
каждую порцию среды роста.
При наличии бактерицидных или бактериостатических веществ нужно руководствоваться
рекомендациями А.4.2.6.1.
11