С. 10
ГОСТ 30264.4—И
Берут две параллельные навески анализируемого продукта и из
каждой делают не менее двух разведений. Каждое разведение ис
следуемого раствора анализируют не менее двух раз.
В пробирку наливают 10 см3 раствора крахмала (субстрата)
и ставят в термостат или водяную баню с температурой (30,0±’
±0,2)°С на 5—10 мин. Затем приливают к содержимому пробир
ки 5 см5 раствора анализируемого продукта н инкубируют смесь
в течение 10 мин при той же температуре.
Затем 1 см* смеси переносят в другую пробирку, помещенную
в кипящую водяную баню, выдерживают в течение 2 мин(для
инактивации фермента) и охлаждают холодной водой. Затем к
смеси добавляют 3 см3 раствора С, перемешивают и оставляют на
45 мин при комнатной температуре.
Одновременно готовят контрольную пробу. Для этого 5 см3
раствора анализируемого продукта выдерживают в кипящей во
дяной бане в течение 10 мин (для инактивации фермента). Затем
раствор охлаждают и добавляют 10 см* раствора крахмала.
Все последующие операции с контрольными, пробами проводят
так же, как и с опытными.
Кроме указанной контрольной пробынаинактивированный
фермент ставят контрольную пробу на рабочий раствор С. Для
этого к 3 см1 этого раствора приливают 1 см3 дистиллированной
воды.
Интенсивность окраски определяют на фотоэлектроколоримет
ре в диапазоне длин волн 390—415 нм в кюветах с толщиной по
глощающего свет слоя 10 мм.
Если контрольные пробы на инактивированный фермент име
ют заметную окраску, то необходимо исследуемый раствор про-
колоркметрировать, взяв в качестве раствора сравнения рабочий
раствор.
Значение оптической плотности должно лежать в пределах,
соответствующих массе глюкозы от 50 до 150 мхг.
3.5. Обра боткар е з у л ь т а т о в
Глюкоамилазную активность (ГлС) в ед^г вычисляют по фор
муле
ГлС=
т
т,-180-10 *
(4)
где т — масса глюкозы, образовавшейся в I см3 гидролизата
за счет действия фермента, найденная по калибровоч
ному графику, мкг;
т\ — масса фермента, содержащегося в 1 см3 гидролизата,
взятая на определение, г;
10— время гидролиза, мин;
180— молекулярная масса глюкозы, г/мкмоль.
Примечание. Глюкоэмилазнаи активность в ед/см* вычисляют по фор
муле 4. только вместо массы фермента берется объем (V).