ГОСТ 30812—2021
- планшеты 96-луночные для автоматического генетического анализатора с уплотнителем, осно
ванием (штативом) и фиксатором;
- пробирки для ПЦР вместимостью 0,2 см3;
- пробирки мини-центрифужные типа Эппендорф вместимостью 0,2; 0,5; 1,5 см3;
- пробирки полипропиленовые с завинчивающейся крышкой типа Фалькон вместимостью 50 см3;
- салфетки бумажные одноразовые по нормативным документам, действующим на территории
государства, принявшего стандарт;
- стаканы стеклянные В-1— 100 ТХС, В-1—250 ТХС, В-1—500 ТХС по ГОСТ 25336;
- цилиндры стеклянные мерные лабораторные вместимостью 25; 50; 100; 250; 500; 1000 см3 по
ГОСТ 1770;
- шпатель металлический по ГОСТ 19126;
- штативы под микропробирки вместимостью 0,2; 0,5 и 1,5 см3 по нормативным документам, дей
ствующим на территории государства, принявшего стандарт;
- штативы-контейнеры для хранения образцов в пробирках вместимостью 1,5 см3.
5.4.4 Допускается использование других средств измерений и вспомогательного оборудования с
аналогичными или более совершенными метрологическими и техническими характеристиками, а также
посуды, реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
5.4.5 Способы выделения ДНК с использованием сорбента и колонок с силиконовой мембраной
рассматривают как равнозначные и взаимозаменяемые.
Примечание — Рекомендуется использовать проверенные и сертифицированные реактивы. Все набо
ры должны иметь в составе инструкции, с которыми необходимо внимательно ознакомиться перед началом работ.
5.5 Порядок подготовки к проведению испытаний
5.5.1 Приготовление реактивов
5.5.1.1 Приготовление 1-кратного электродного буфера ТАЕ
В зависимости от необходимого объема 1-кратного электродного буфера ТАЕ для заполнения
электрофорезной камеры и приготовления агарозы применяют один из нижеприведенных вариантов:
- в мерную колбу вместимостью 500 см3 добавляют 10 см3 50-кратного концентрированного бу
ферного раствора ТАЕ и доводят объем полученного раствора до 500 см3 дистиллированной водой,
затем перемешивают;
- в мерную колбу вместимостью 1000 см3 добавляют 20 см3 50-кратного концентрированного бу
ферного раствора ТАЕ и доводят объем полученного раствора до 1000 см3 дистиллированной водой,
затем перемешивают;
- в мерную колбу вместимостью 2000 см3добавляют 40 см3 50-кратного концентрированного бу
ферного раствора ТАЕ и доводят объем полученного раствора до 2000 см3 дистиллированной водой,
затем перемешивают.
Срок хранения 1-кратного электродного буфера ТАЕ составляет 6 мес при комнатной температуре.
5.5.1.2 Приготовление агарозного геля
В посуду из термостойкого стекла вместимостью 500 см3 вносят 3,6 г агарозы, добавляют 200 см3
1-кратного электродного буфера ТАЕ. Полученную суспензию агарозы в той же посуде доводят до ки
пения в СВЧ-печи (при средней мощности нагрева), периодически помешивая и не допуская
бурного кипения, продолжают нагревать до абсолютно прозрачного состояния.
Агарозу охлаждают до температуры от 50 °С до 60 °С, добавляют 5 мм3раствора этидия бромида
и аккуратно перемешивают. Далее выдерживают в термостате при температуре 55 °С не менее 15 мин.
5.5.1.3 Приготовление реакционной смеси для ПЦР
В пробирку вместимостью 0,2 см3 вносят 1 мм3 праймера «tPro2» концентрацией 10 мкмоль/дм3,
1 мм3 праймера «HN20» концентрацией 10 мкмоль/дм3, добавляют реактивы из набора для ПЦР:
2,5 мм3 10-кратного ПЦР-буфера; 1 мм3 раствора MgCI2 концентрацией 50 ммоль/дм3; 1 мм3
сме си дНТФ концентрацией 2,5 моль/дм3; 0,5 мм3 Taq-полимеразы концентрацией 5 ед/мм3;
добавляют 17 мм3деионизованной воды для молекулярной биологии и перемешивают.
5.5.1.4 Приготовление реакционной смеси для секвенирования ПЦР-продукта
Впробирку вместимостью 0,2 см3вносят0,8 мм3праймера «HN20» концентрацией 10 мкмоль/дм3,
добавляют 2 мм3 реагента для секвенирования, 1 мм3 5-кратного буфера из набора для секвениро
вания по Сэнгеру добавляют 2,2 мм3 деионизованной воды для молекулярной биологии и переме
шивают.
10