ГОСТ 30812—2021
- набор для выделения геномной ДНК из различных тканей1).
Примечание — В настоящем стандарте допускается использование любого из выбранных методов вы
деления ДНК. Методы выделения ДНК с использованием сорбента и колонок с силиконовой мембраной рассматри
вают как равнозначные и взаимозаменяемые;
- набор для ПЦР. Содержащий Taq-полимеразу, 10-кратный реакционный ПЦР-буфер, раствор
магния хлорида концентрацией 50 ммоль/дм3, смесь четырех дезоксирибонуклеозидтрифосфатов кон
центрацией 2,5 ммоль/дм3 каждый, инструкцию по использованию набора для постановки ПЦР2).
Примечание — В настоящем стандарте допускается использование готовых 2,5- и 5-кратных мастер-
миксов для ПЦР. Для улучшения специфичности амплификации рекомендуется использовать полимеразу, инак
тивированную антителами. Активация фермента происходит в течение первого шага программы амплификации
— предварительной денатурации;
- набор для секвенирования ДНК по Сэнгеру, содержащий реагент — смесь флуоресцентно-ме-
ченных ддНТФ — терминаторов элонгации праймера 3);
праймердля постановкиПЦР«tPro2»нуклеотиднойпоследовательностью;5’—
ACCCTTAACTCCCAAAGC—3 ’лиофилизированный или водный раствор концентрацией 10 мкмоль/дм3
и чистотой олигонуклеотида не менее 95 %;
праймердля постановкиПЦР«HN20»нуклеотиднойпоследовательностью:5’—
GTGTTATGCTTTAGTTAAGC—3’лиофилизированный или водный раствор концентрацией 10 мкмоль/дм3
и чистотой олигонуклеотида не менее 95 %;
- полимер для капиллярного электрофореза4);
- спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962;
- трис-ацетат-ЭДТА электродный буфер для горизонтального электрофореза в агарозном геле
(50-кратный концентрированный буферный раствор ТАЕ), свободный от нуклеаз5);
- формамид высокоочищенный, деионизированный для денатурации нуклеиновых кислот перед
капиллярным электрофорезом6);
- буфер электродный для капиллярного электрофореза (10-кратный концентрированный буфер
ный раствор)7);
- этидия бромид, водный раствор концентрацией 10 г/дм3 по нормативным документам, действу
ющим на территории государства, принявшего стандарт.
5.4.3 Для проведения испытаний применяют следующие посуду и материалы:
- колбы мерные ТХС 500; 1000; 2000 см3 по ГОСТ 1770;
- наконечники с фильтром для дозаторов с варьируемыми объемами доз: 10; 200; 1000 мм3;
- перчатки одноразовые лабораторные из латекса без пудры по нормативным документам, дей
ствующим на территории государства, принявшего стандарт;
- пинцет медицинский по ГОСТ 21241;
1) Примером могут служить такие наборы, как: а) «К-Сорб» (СИНТОЛ, РФ); б) «ExtractDNA Blood» (Евроген,
РФ); в) «DNeasy Blood & Tissue Kit» (Qiagen, Нидерланды); г) «Wizard® SV Genomic DNA Purification System»
(Promega Corp., США); д) «NucleoSpin Tissue» (Macherey Nagel, Германия).
2) Примером могут служить наборы: а) «ПЦР-Комплект» (СИНТОЛ, РФ); б) «ScreenMix» (Евроген, РФ);
в) Мастермиксы серии «5х Master Mix» (Диалат, РФ).
Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей настоящего
стандарта.
3) Примером подходящего набора для секвенирования по Сэнгеру могут служить наборы: a) «BigDye™
Terminator Cycle Sequencing Kit» (Applied Biosystems/ThermoFisher Scientific, США); 6) «BrilliantDye™ Terminator Cy cle
Sequencing Kit» (Nimagen, Нидерланды).
4) Примером подходящего реактива могут служить: а) «ПДМА-6» (СИНТОЛ, РФ); б) «NimaPOP-б»,
«NimaPOP-7» (Nimagen, Нидерланды); в) «РОР-7» (Applied Biosystems/ThermoFisher Scientific, США).
5) Примером подходящего реактива может служить «50Х ТАЕ электродный буфер» (Евроген, РФ).
6) Примером подходящего реактива может служить: a) «Hi-Di™ Formamide» (Applied Biosystems, США);
6) «Seq-DI Formamide v2» (Nimagen, Нидерланды).
7) Примером подходящего реактива могут служить: а) «ТАПС буфер 10Х» (СИНТОЛ, РФ); б) «А.С.Е.™
sequencing buffer, 10Х, concentrate» (VWR Chemicals, Австрия); в) «NimaPOP 10X Running Buffer (with EDTA)»
(Nimagen, Нидерланды). Данная информация является рекомендуемой и приведена для удобства пользователей
настоящего стандарта.
9