ГОСТ Р ИСО 14160-2003
Хотя прямой подсчет и построение кривой выживания дают больше информации о кинетике инактивации
тест-микроорганизма, они в то же время могут потребовать больше времени и ресурсов. Процедуры прямою
подсчета связаны с извлечением всех жизнеспособных микроорганизмов после определенного времени вы
держки в жидком химическом стерилизующем средстве. Извлечение может проводиться гак же, как при оценке
бионагрузки (ГОСТ Р ИСО 11737-1). например, путем гомогенизации испытуемого компонента и приготовле
ния соответствующих разведений для подсчета выживших микроорганизмов.
Гомогенизация испытуемого компонента (например, животных тканей) может быть проведена путем его
асептического вымачггвания или дисггсргиронания/растворения в стерильном разбавителе. Готовятся последо
вательные разведения суспензии, гг на соответствующих разведениях производится прямой подсчет по стан
дартных! методам (ГОСТ Р ИСО 11737-1).
А.4.2.5 Использование носителей из тканей
А.4.2.5.1 Общие положения
При использовании тест-микроорганизма, показавшего при испытаниях суспензии наибольшую резис
тентность к воздействию жилкою химического стерилизующего средства, кинетика его инактивации должна
изучаться в присутствии испытуемого компонента. Планирование опытов должно включать контролируемые
обработки (при худших условиях) инокулированного или культивированного испытуемого компонента в
жидком химическом стерилизующем средстве при разных временах выдержки. Образны должны отбираться
через определенные интервалы врехгени для оценки выжившей популяции валнлированным методом восста
новления хшкроорганизмов.
Изучение кинетики инактивации завершается построением кривой выживании в полулогарифмической
шкале (на графике в координатах логарифм числа выживших микроорганизхюв —время выдержки). Затем
рассчитывается величина D тсст-микроорганизма в присутствии испытуемого компонента и ггри Иаихудших
условиях стерилизации. Чтобы обеспечить воспроизводимость данных, опенка кинетики инактивации должна
проводиться ггс менее грех раз.
А.4.2.5.2 Выбор носителя
Исследования кинетики микробиологической инаклгшщигг должны проводиться га материалах носителя,
которые создают наибольшее сопротивление процессустерилизации. Выбор носителя должен проводиться с учетом
обеспечения контакта и/ггли взаимодействия жидкого химического стерилизующего средства с носгпелсхг (напри
мер, гидрофобный волокнистый материал может труднеестерилизоваться, чем гладкие гзгдрофилыше поверхности).
Если такой выбор носителя нс является очевидным, необходимо провести скрининг для определения
наиболее зрудн«стерилизуемых носителей.
А.4.2.5.3 Определение хшкроорганизма (ов) на испытуемом компоненте (носителе)
Метод определения жизнеспособных хшкрооргаштзхгов на носителе до начала стерилизации в жидком
химичсскохг средстве ихгсст первостепенную важность при создании условий -эффективной стерилизации с
точки зрения установления противодействующих стерилизации факторов, встречающихся в практике. Могут
быть использованы два .метода определения жизнеспособных микроорганизмов на испытываемом компоненте:
пряхгая инокуляции или культивирование при условиях, имитирующих производственные.
При прямой инокуляции используется жизнеспособная споровая или клеточная суспензия, которая
наносится на носитель непосредственно перед выдержкой в жидком химичсскохг стерилизующем средстве.
Нужно обратить внимание на время, необходимое для проникания инокулята в носитель и связывания его с
носителем, прежде чем начать стерилизацию, а также необходимо учесть бактерицидный эффект, который
носитель может оказывать на инокулят.
Если выбранный микроорганизм способен давать рост в/гта продукции при нормальных производствен
ных условиях, необходимо применить кулитивирование микроорганизмов в условиях, имитирующих производ
ственные, а при возможности делать это и дополнительно к инокуляции. Должен быть установлен
хгетод культивирования носителя(лей) с тест-микроорганизмами. При таких условиях количество
жизнеспособных хшкроорганизмов в/на продукции должно быгь нс менее 1000 колонисобразуюших единиц
(КОЕ). В каждой отдельной системе культивирования это количество КОЕ до начала стерилизации должно
быть одинаковым в кажлом компоненте. Данные для подтверждения соответствующей минимальной
популяции ггсе однородности должны быть собраны непосредственно перед изучением кинетики
инактивации.
Метод восстановлении жизнеспособных микроорганизмов носителя после стерилизации жидким хими
ческих! средствохг должен быть определен и валидирован. Валидация должна показать, что выбранный метод
обеспечивает воспроизводимое восстановление выживших микроорганизхюв.
А.4.2.6 Влияние органических материалов
Для некоторой продукции контахгинаиия органическими материалах!!! может служить фактором, огра
ничивающим эффективность процесса. Исследования должны включать оценку влияния растворов, содержа
щих соответствующие органические вещества (например, сыворотки, альбумин гг т.д.) или стерильные
суспензии тканей. Вид и концентрацию органического хгатернала следует документировать.
Для продукции, которая может высушиваться в присутствии органического материала, должны исполь
зоваться инокулировашгыс носители, содержащие микроорганизмы, высушенные в соответствующем органи-
13