ГОСТ 32064—2013
На глюкозном агаре с желчью и фиолетовым красным бактерии семейства Enterobacteriaceae об
разуют колонии розовые, красные или пурпурные (с ореолом или без него).
На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии темно-красные с метал
лическим блеском или без него, розовые, прозрачные.
Из каждой инкубированной чашки (см. 9.1.4). на которой обнаружены типичные колонии, выбирают
потри хорошо изолированных колонии каждого типа и пересевают каждую отобранную колонию отдель
но на поверхность питательного агара.
Посевы инкубируют при температуре (37
1
1) °С в течение (24 ± 2) ч.
9.1.6
Подтверждениепринадлежности типичных колонийк бактериям семейства
Enterobacteriaceae
Принадлежность выросших культур к бактериям семейства Enterobacteriaceae подтверждают по
отношению к окраске по Граму отсутствию оксидазы и по ферментации глюкозы.
9.1.6.1 Окраска по Граму
Приготовление мазков из культур, выросших на скошенной поверхности питательного агара,
и окраску их по Граму проводят по ГОСТ 30425.
Бактерии семейства Enterobacteriaceae — грамотрицательные палочки.
Допускается окраскупо Граму заменять тестом Грвгерсена. для этого на предметном стекло
в капле 3 %-ного водного раствора калия гидроокиси эмульгируют культуру микроорганизмов, взя
тую из колонии с агаризованной среды. Если через несколько секунд взвесь ослизнявтся и за петлей
тянутся слизистые нити, то это указывает на принадлежность испытуемой культуры к
грамот-рицательному виду. У грамположитольных бактерий слизистых нитей не образуется.
П р и м е ч а н и е — Пункт 9.1.6.1 введен дополнительно в связи с тем, что бактерии семейства Entero
bacteriaceae это, прежде всего, грамотрицательные бактерии, а при идентификации переходят от общих при
знаков к частным, поэтому прежде всего необходимо определить отношение выявленных бактерий к окраске по
Граму.
9.1.6.2
Определение отсутствия оксидазы
Используя платиново-иридиевую петлю (проволоку) или никель-хромовую или стеклянную палоч
ку, отбирают культуры, выросшие на поверхности питательного агара (см. 9.1.5) и наносят штрихами на
фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для определения оксидазы (6.11).
Результат испытания считают отрицательным, если фильтровальная бумага на месте нанесения
штрихов не посинела в течение 10 с.
9.1.6.3
Определение ферментации глюкозы
Для определения ферментации глюкозы испытуемую культуру высевают уколом в глюкозный
агар (6.4) или среду Гисса с глюкозой (6.8). Посевы термостатируют при температуре (37 ± 1) °С в тече
ние (24 ± 2) ч.
Бактерии семейства Enterobacteriaceae ферментируют глюкозу с образованием только кисло
ты (цвет среды меняется) или кислоты и газа.
9.1.7 По результатам дополнительного подтверждения к бактериям семейства Entorobacte-
riaceae относят факультативно-анаэробные, не образующие спор грамотрицательные оксидаэоотри-
цательные палочки, сбраживающие глюкозу с образованием кислоты или кислоты и газа.
9.2 Метод НВЧ-определение количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
9.2.1 Приготовление исходного разведения идесятикратных разведений — поГОСТ31099 и
ГОСТ 26669.
Готовят достаточное число разведений по ГОСТ26669, гарантируя, что все пробирки, соответству
ющие конечному разведению, покажут отрицательный результат.
9.2.2 Инокуляция и инкубация
9.2.2.1Используют по три пробирки для каждой пробы продукта для анализа и1или его разведе
ния.
9.2.3
Предварительное обогащение в неселективной среде
Посевы для предварительного обогащения проводят с учетом требований 4.2.1.
Например, вкахщую из трех пробирок с 9 см3забуференнной пелтонной воды вносят по 1см3про
дукта. если анализируемый продукт жидкий, или вносят по 10 см3исходного разведения нежидкого про
дукта в колбу с 90 см3забуференнной пелтонной воды.
Ю