ГОСТ 31746—2012
Осторожноперемешиваютинокулятсо средой идля застыванияоставляютчашкиПетри вспокой
ном состоянии на холодной горизонтальной поверхности.
8.4.2 Чашки Петри с посевами после застывания среды переворачивают ипомещают в термостат
при температуре (37 ± 1)°С на 18—24 ч. Если необходимо, продолжают инкубированиееще 18—24 ч.
8.4.3 После инкубирования подсчитывают типичные и атипичные для коагулазоположительных
стафилококков колонии, в соответствии с8.1.5.
Для подтверждения принадлежности выросших типичных и (или) атипичных колоний к коагулазо-
положительным стафилококкам отбирают колонии в соответствии с 8.3.6.
8.4.4 Каждую отобранную колонию отдельно пересеваютпо 8.1.5.
Посевы инкубируют при температуре (37 ♦.1) °Св течение (24 ± 3) ч.
8.4.5 Допускается также выявление коагулазоположительных стафилококков проводить
посевом вилина агаризованную средуприусловии, чтонавескупродукта, в которойпредусматрива
етсявыявление, возможно посеятьпо этомуметоду.
Привыявлениикоагулазоположительныхстафилококковпосевомв илина агаризованную среду
подсчета количестваколонийне проводят.
9 Подтверждение принадлежности выявленных микроорганизмов
к коагулазоположительным стафилококкам
Для подтверждения принадлежности к коагулазоположительным стафилококкам у выросших мик
роорганизмов и отобранныхпо8.1.5.8.2.3.8.3.7 и8.4.4 определяютотношение кокраскепо Граму, спо
собность коагулировать плазму крови кролика и способность образовывать каталазу.
9.1 Окраска поГраму
Изкультур готовят мазки, окрашивают их по ГрамупоГОСТ 30425и микроскопируют.
КоагулаэоположительныестафилококкиположительноокрашиваютсяпоГраму. имеютшаро
образную форму, клетки диаметром0,6—1.0мкм. располагающиеся чаще (ноне всегда) в виде скоп
лений. напоминающихгроздьявинограда.
9.2 Определение каталазы
Способность выросшихмикроорганизмов образовыватькаталазуопределяютпо ГОСТ30425.
Коагулазоположитвльные стафилококки образуют каталазу.
9.3 Определение способности коагулировать плазму крови кролика
9.3.1 Способностькоагупироватьплазмукрови кролика определяюту микроорганизмов, окра
шивающихсяположительно и образующих каталазу.
9.3.2 На Байрд-Паркер агаре с кроличьей плазмой и бычьим фибриногеном подсчитывают коли
чествотипичныхколонийс зонойпреципитации, указывающей на коагулазнуюактивность, иэти колонии
бездальнейшего подтверждения считают относящимися к коагулазоположительным стафилококкам.
9.3.3 Соблюдая правила асептики, в стерильные пробирки подходящего размера (например,
10 х 75 мм) добавляют0.1 см3 каждой культуры, выросшей на среде (см. 5.2)по 8.1.5.8.2.3,8.3.7 и 8.4.4,
и 0.3 см3 плазмы кролика (если изготовителем кроличьей плазмы не установлены другие количества)
и инкубируют при температуре 37 вС.
Опрокидывая пробирку, исследуют плазму на свертывание после 4—6 ч инкубирования и. если
тест отрицательный, просматривают через 24 ч инкубирования или исследуют после инкубационного
периода продолжительностью, установленной изготовителем кроличьей плазмы.
Тестна коагулазусчитаютположительным, есликультура показала, покрайнеймере. 3+ — оценку
коагулазной реакции, отмеченной на рисунке 1. Реакцию на 1+ или 2+ оценивают как промежуточную.
Для контроля качества каждой партии плазмы добавляют 0.1 см3стерильного бульона на основе
вытяжкиизсердца имозга к рекомендуемому количествуплазмы кролика иинкубируютбезпосева куль
туры микроорганизмов при температуре 37 °С. при этом в контролируемой плазме недолжно быть при
знаков свертывания.
9.3.4 Допускается кплазме кровикролика, приготовленнойи разлитойпопробиркам, добавлятьпо
одной петлеиспытуемыхкультурсагаризованныхсред, оставляяодну пробиркус разведенной плазмой
в качестве контроля незасеянной.
13