ГОСТ Р ИСО 22442-3—2011
Приложение Е
(справочное)
Статистическая оценка титров вирусов и коэффициентов сокращения и оценка
их достоверности11
Титрации вирусов подвержены проблемам колебания, свойственным всем системам биологических проб.
Таким образом, для определения надежности исследования необходима оценка точности вирусных титраций и вы
веденных из них коэффициентов сокращения, а также достоверности проб. Целью статистической оценки является
установление того факта, что исследование было проведено на приемлемом уровне вирусологической компетен
тности.
1) Методы проб могут быть либо дискретными, либо количественными. Дискретные методы включают в себя
пробы инфицированности в животных или пробы дозы, инфицирующей культуру ткани (ТОЮ), в которых животное
или клеточную культуру оценивают как инфицированное или нет. Титры вирулентности затем измеряют, используя
пропорцию инфицированных животных или культур. При количественных методах измеряемая вирулентность по
стоянно меняется в зависимости от ввода вируса. Количественные методы включают в себя пробы бляшек, где
каждая бляшка соответствует одной инфекционной единице. Как дискретные, так и количественные пробы подда
ются статистической оценке.
2) Колебания могут появиться внутри пробы в результате ошибок при разведении, статистических эффектов
и различий внутри системы проб, которые либо неизвестны, либо трудноконтролируемы. Эти эффекты с большей
вероятностью будут более значительными при сравнении разных прогонов проб (межпробное колебание), чем при
сравнении результатов внутри одного прогона (внутрипробное колебание).
3) Пределы 95 % достоверности для внутрипробного колебания и для межпробного колебания обычно дол
жны быть порядка г 0.5 tog,Dили лучше. Межпробное колебание может контролироваться путем выбора эталонного
препарата внутрилабораторного использования, оценка крепости которого должна быть в пределах приблизитель но
0.5 logn средней оценки приемлемости пробы, установленной в лаборатории. Внутрипробное колебание может
быть оценено стандартными методами, приведенными в пособиях. В любом конкретном эксперименте, если точ
ность титрации является ниже данных контрольных значений, исследование может быть приемлемым при обосно
вании.
4) Сокращение вирусной нагрузки следует вычислять с помощью вирусных титров, определенных экспери
ментальным путем.
Пределы 95 % достоверности коэффициентов сокращения должны быть получены, когда это возможно. Они
могут быть приближенно выражены как ± (s* ♦ а2), где i s является пределом 95 % достоверности для вирусных
проб исходного материала, а г в — пределом 95 %достоверностидля вирусной пробы материала после ступени.
Если после ступени дезактивации/удаления ни один образец не показывает признаков вирулентности, коэф
фициент сокращения невозможно оценить статистическим путем. Для получения расчета минимального коэффи
циента сокращения титр должен быть выражен как меньший либо равный одной инфекционной единице в обьеме
наиболее высокой испытуемой концентрации.
Можно ожидать, что ни один образец не покажет признаков вирулентности, особенно после мощных процес
сов дезактивации Для того чтобы увеличить оценочный минимальный коэффициент сокращения эффективного
процесса дезактивации, насколько возможно, необходимо опробовать наибольшее возможное количество обрабо
танного нераэведенного материала.
Необходимо учесть данные рекомендации должным образом для агентов TSE.
Данное приложение содержит текст, который первоначально относился к вирусам (CPMP/BWP 268/95,
14 февраля 1996 г.).
14